细胞工程第三章植物组织与细胞培养.docxVIP

第 3 章 植物组织与细胞培养 3.1植物组织培养与细胞培养的区别 习惯上： 由于体外培养技术最初是从培养组织发展起来的，所以在习惯上，动物学和医学上又往往用组织培养这一术语泛指细胞、组织和器官在适当的培养条件下离体生长的技术。 单细胞培养与组织和器官培养在技术上具有较大的区别 严格意义上： 组织培养是指从机体内取出组织或细胞，模拟机体内生理条件，在体外进行培养，使之生存或生长形成组织。 细胞培养是指动植物细胞在体外条件下的存活或生长，此时细胞不再形成组织。 植物组织培养（Plant tissue culture）：是指在无菌条件下，将离体的植物器官（如根尖、茎尖、叶、花未成熟的果实、种子）、组织（如花药组织、胚乳、皮层等）、胚胎、原生质等培养在人工配置的培养基上，给予适当的培养条件，诱发产生愈伤组织、或者长成完整的植株的技术。 离体培养（culture in vitro) 试管培养（test tube culture) 常用术语 外植体(explant)：植物组织培养中用来进行离体培养的离体材料，可以是器官、组织、细胞和原生质体等。 愈伤组织(callus)：是由外植体组织增生的 细胞产生的一团不定的疏松的排列的薄壁细胞。 继代培养或传代培养：愈伤组织在培养基上生长一段时间以后，营养物枯竭，水分散失，并已积累一些代谢产物，此时需要将其转移到新的培养基上，这种转移称为继代培养或传代培养。 褐变（褐化）：是由于组织中的多酚氧化酶被激活，使细胞的代谢发生变化，酚类物质被氧化后产生的醌类物质，这类物质是棕褐色，对外植体产生毒害作用，严重时导致死亡。 玻璃化(vitrification)：表现为试管苗叶、嫩梢是水晶透明或半透明，水浸状；整株矮小肿胀、失绿；叶片皱缩成纵向卷曲，脆弱易碎；叶表缺少角质层、蜡质、没有功能性气孔，不具有栅栏组织，仅有海绵组织。 不定芽（adventitious buds)：从现存的芽以外的任何器官和组织上通过器官发生重新形成的芽。 不定根（adventitious roots)：从现存的根以外的任何器官和组织上通过器官发生重新形成的根。 3.2 发展历史 发展历史： 细胞培养技术（组织、器官） 细胞融合技术 动物细胞工程 胚胎工程技术（核移植、胚胎分割） 克隆技术（细胞、器官和个体） 细胞工程 高等生物 植物组织、器官培养技术 细胞培养技术 植物细胞工程 原生质体融合与培养技术 亚细胞水平的操作技术 植物细胞工程是在植物组织培养的基础上发展和完善起来的，因此，植物细胞工程亦是广义概念上的植物组织培养。 植物细胞发展工程发展历史就是植物组织培养技术的历史。 发展过程大致划分为三个阶段 3.2.1 探索阶段 细胞学说的产生和细胞全能性的提出为组织培养技术的产生奠定了理论基础。 细胞学说(cell theory) 19世纪30，Schleiden和Schwann创立的 组织培养研究的思想基础 细胞全能性 1902年德国植物学家哈泊兰德（Haberlanclt）在细胞学说的基础上提出的。 植物细胞具有全能性，即植物活细胞具有能够发育成为完整植株的潜在能力。 而且进行了相关实验，但失败了！！！ 原因：一是取材不当 二是培养基中不含诱导激素 由此，被称为——植物组织培养之父 3.2.2培养技术建立阶段 20世纪30年代至50年代末期，植物组织培养建立了两个与培养技术有关的重要技术模式。 培养基模式 激素调控模式 培养基模式 White 于1934年，使番茄根的离体培养实验首次成功。 White 于1937年，发现B族维生素在离体培养中的作用，产生了由无机盐与有机成分组成的White培养基。建立植物根的离体培养技术。 法国科学家高特里特（R.J.Gautheret）1939年在添加B族维生素和IAA的培养基上连续培养胡罗卜根的形成层获得成功。 诺比考特（Nobecourt)于1938年以培养胡萝卜根为外植体，在固体培养基上诱导形成了愈伤组织。 White、Gautheret和 Nobecourt植物组织培养的奠基人 他们的贡献 建立了植物组织培养的综合培养基，它包括无机盐、有机物和生长激素。 发现了B族维生素在组织培养中的作用，基本建立了植物组织培养技术。 现在所用的培养基和培养方法原则上都是这三位科学家所建立的方法和培养基的演变。 激素调控模式 1957年，斯科克(Skoog)和米勒(Miller)提出了有关植物激素控制器官形成的概念，建立了细胞分裂素/生长素比率控制植物组织的形态发生和器官分化的激素调控模式。 激素调控模式——细胞分裂素/生长素 比植高时----------产生芽 比