免疫组织化学讲义(x的in).docVIP

组织学病理学技术与免疫组织化学课程 任课教师：张雷 学时数：20 光镜组织病理切片技术(6学时) 取材注意事项及组织固定法 制片方法：石蜡切片、冰冻切片、铺片、磨片 HE染色及特殊染色方法 组织化学技术（4学时） 固定与制片 蛋白质、糖类、脂质及核酸组织化学反应 酶组织化学 免疫组织化学技术（10学时） 免疫学及免疫组织化学的原理和基本技术 常用免疫组织化学方法 免疫酶组织化学技术 免疫电镜技术 原位杂交组织化学 细胞凋亡的过程及相关因素 免疫组织化学结果判定及图象分析 显微照相 第一章概论 病理学经历了大体器官病理学、细胞病理学、超微病理学、免疫病理学和分子病理学的发展阶段，正在向21世纪的信息病理学前进。国际著名病理学家Karl lennert教授有句名言：“技术是病理学之母”。回顾过去病理学的重大发展，无一不是新技术的发明与应用的结果。正如程大民院士指出的那样：“病理学的理论和技术被视为一辆车的两个车轮，缺一不可，互为依存，互相促进，两者的结合决定着病理学的发展。” 病理学技术包括传统病理学技术和现代新技术，传统的formalin固定，石蜡切片和HE染色技术仍然是病理学的基本技术，大量应用于基础和临床病理学日常工作中，保证和提高常规技术质量和现代设备水平十分重要。从传统病理学发展的经验看，器官病理学、细胞病理学以及超微病理学基本都属于形态学。免疫细胞化学虽然是形态、代谢及功能的三位一体的方法，也基本以形态为主，反映一定代谢及功能状态。特别在方法上与传统病理学技术：包埋、制片、染色基本一致，所以免疫荧光技术虽由微生物学家开端，但很快就在病理学中得到了广泛应用。 分子生物学技术向分子病理学技术的发展是“直通车”。其中形态学部分，如分子杂文、原位来交、原位PCR、末端标记、染色体的变化等，也是由于与传统病理学技术密切结合，不但在病理学研究中，而已在临床病理诊断中迅速得到了应用。此外，目前关于分子病理学工作，除了病理学家外，分子生物学家、生物学家、遗传学家甚至临床学家都在进行研究。所以分子病理学在医学专业教学中应该怎样划归，在医院工作中如何归等，都将可能是面临的实际问题。 第一章 病理切片技术： 大生物学标本或医学标本在生活状态下多为无色透明，而且组织一旦离开机体后很快就会死亡，其结构就会失去正常状态。所以必须对组织采取固定、切片、和染色措施，由于组织内部结构的不同，在嗜色性能上各有所异，光波通过时，又由于不同颜色再吸收程度上的不同，因此在显微镜下呈现不同的折射率，也就是说经过固定和染色后，光波通过这些被检组织成分时，波长和振幅发生改变，所以在显微镜下才能清晰的观察其组织结构，我们称之为组织制片技术。组织制片技术的应用，从1665年HOOK发现细胞开始，以有300多年的历史。最早应用冰冻切片；随后又进一步利用石蜡的硬度，以石蜡包埋组织，制成石蜡切片，后来又利用明胶、火棉胶、碳蜡和塑料等物质的韧性，以其包埋组织而制成切片。 组织制片技术随着生物学和医学的发展而发展。切片染色方法可用以显示不用细胞和组织形态，以及细胞和组织中某些化学成分含量的变化。组织制片技术以成为生物学、动物学、组织学、生理学、植物学及病理解剖学和法医学等学科用以研究、观察细胞、组织的生理、病理形态变化的主要方法，也是教学和科研中不可缺少的一个组成部分。 制片的种类 组织切片法： 是研究组织学、病理学最为广泛应用的基本方法。任何组织切片都必须依靠切片机将组织切成薄片（厚度以μm计），再进行染色而得到结果。在切成薄片前必须设法使组织内部渗入足够的支持物质，使组织保持一定的硬度，然后使用切片机进行切片。根据所使用支持物质的不同，切片方法分为： 石蜡切片法 火棉胶切片法 冰冻切片法 超薄切片法（电镜技术） 二．组织非切片法：不用切片机不经切片手续而制成组织切片的方法。 分离标本：将整体或小块组织浸入化学药品配制的分离液内一段时间，溶去间质成分，然后充分振荡，制成的标本经染色或不经染色，即可观察单个完整的细胞。 涂片标本：将骨髓、血液或脱落细胞涂于载玻片上，经固定和染色制成的标本，用以观察细胞形态及微细结构。 压片标本：将整体或小块组织经药物处理及染色、撕碎压平于载玻片上所制成的标本。 铺片标本：将膜片状组织；如大网膜，肠系膜或皮下疏松结蹄组织铺于载玻片上，经固定及染色等过程制成的标本。 磨片标本：将坚硬的组织；如硬骨和牙，不经脱钙磨成薄片，经染色或不经染色制成的标本。 血管注射标本：将染色液，如卡红明胶、普鲁士蓝、墨以单色或双色注如血管内，以观察脏器的血管分布及内皮细胞的表面形态。 组织印片：将未经固定的新鲜组织小块（如手术后或尸体解剖标本）压印玻璃片上，经固定后再行染色。 制片方法的程序 一．组织切片制作过程的各种