2010PCR同室间质控.pdfVIP

河北省荧光定量PCR检测乙肝、 丙肝的室间质评分析 东彦 博士 河北医科大学第二医院检验科 室内质控 《临床实验室定量测定室内质量控制指南》 所有临床实验室的所有向患者提供报告的 定量测定项目必须开展室内质控 室内质控控制着自吸取样本至获得测定结 果并对结果进行分析的整个测定过程，是 保证高质量操作的必要措施。 绝对定量与相对定量的定义 荧光定量PCR 室内质控 1.检测标本的质量监控 2.采用试剂的质量监控 3.检测结果的质量监控 检测标本的质量监控 1.标本管理程序 2.标本收集程序 3.标本处置程序 4.标本拒收程序 5.标本保存程序 6.标本标号程序 采用试剂的质量监控 1.观察扩增后的荧光背景的噪音和荧光曲线 的抖度 2.观察试剂盒扩增后的标准曲线的斜率和截 距 检测结果的质量监控 1.试剂空白和阴性质控 其荧光曲线应位于阈值线下部或缺失。 检测扩增产物的污染 2.临界阳性血清 是室内质控的关键，是室内质控精密度观 测的最敏感的窗口，也是提示试验成功与 否的最重要的标志。 临界阳性血清的配制 取已知HBVDNA浓度的血清1ml,用正常血 4 浆稀释至4 ×10 为最佳，反复混匀，没管 110微升分装于0.5ml的离心管中，1000r/s 离心10s,竖直排放，于-20度以下保存。保 存期可达1年。 计算一个月全部质控血清检测结果的均值 和标准差。 标准品 利用标准曲线进行质控 斜率 截距 利用单次的值和连续20次的值进行质控趋势分析 定量PCR 的数学原理 斜率与扩增效率 斜率与扩增效率 Ct=斜率*lg浓度+截距 这个时候斜率的意义是，原始浓度每差10 倍时对应的循环数。 大家知道，理论上1个循环是2倍，2个循环 是4倍，3个循环是8倍，4个循环是16倍， 所以10倍应该是3-4之间才对，实际上，也 就是L0G以2为底10的对数，3.32. 荧光定量PCR 斜率和CT值 截距 Sample 2 Ck 10 c n e c s 4 e Ck 10 r u o l F Cycle number r e b m u n