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小鼠明矾OVA 致哮喘模型 哮喘是一种由多种炎症细胞及炎症介质参与的气道慢性炎症性疾病，气道炎症、平滑肌功能紊乱 和气道重塑是哮喘的主要病理改变，发病率呈逐年增加趋势。 现已发现有多种细胞因子参与哮喘发病的调控，其中关于Th1/Th2 类细胞因子失衡学说为目前的研究 热点。IFN- γ、IL-4 分别是Th2、Th2 细胞的特征性细胞因子，在哮喘的发病机制中，IFN- γ和IL-4 的不平衡是引起IgE 产生异常和哮喘发病的重要因素，调节Th1 细胞因子活性或抑制Th2 细胞因子 已成为哮喘防治探讨的新热点。最新的研究发现在抗原刺激后气道上皮可以使前炎性细胞因子 IL-25 表达增加，促使 IL-4 及 IL-13 等 Th2 细胞因子过量表达 1.实验动物 SPF 级Balb/C 小鼠，雄性，周龄为4w~6w ，体重为20g~22g 。 2.实验分组 实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15 只动物。 3.主要试剂 卵蛋白（OVA ） 明矾 4.实验周期 6W 5.建模方法 1.明矾致敏佐剂：10%明矾溶液（溶于双蒸水）2ml 与500ug/ml OVA （溶于PBS ）2ml 等量混合 后，用NAOH 调PH 值为6.5，室温孵育60min，750r/min ，离心5min，去掉上清液，重溶于2ml PBS 。 致敏时每只小鼠腹腔注射200ul ，其中含2mg 明矾和100ug OVA。 2.致敏：小鼠分别于第0、14 天时腹腔注射明矾致敏佐剂0.2ml ，对照组注射相同剂量的PBS 溶 液，正常饮食饲养。 3.激发：雾化吸入，第21 天时小鼠放入有机玻璃箱，5% OVA 雾化吸入。每天30min，共7d ， 最后一次致敏后24h 内检测。以小鼠出现烦躁不安、呼吸急促、腹肌痉挛等阳性反应作为造模成功的 标准。对照组采用PBS 雾化吸入，其他操作均相同。 4.末次激发24h 麻醉小鼠，摘眼球取血，室温静置2h 后于4℃3000r 离心10 分钟提取血清，放入 -80 冰箱冻存。取左肺组织于 4%多聚甲醛溶液中固定用于病理染色；右肺组织液氮冷冻，-80℃保存 用于分生标本。 6.模型评估： 1.一般观察 哮喘模型组大鼠在激发开始后出现打喷嚏、点头呼吸、呼吸急促、哮鸣音、腹肌收 缩、烦躁等典型哮喘发作症状，并且后期观察中发现饮食减少、毛色无光泽、行动迟缓及体重逐渐下 降。 2.支气管肺泡灌洗液(BALF)的收集最后1 次激发24 h 后(第28 天)将各组小鼠颈椎脱臼处死,无菌 条件下分离气管,结扎左主支气管后,剪开右主支气管插入气管导管并固定,无菌生理盐水灌洗 3 次, 1mL/次,收集的BALF 于4 ℃1200 r.min-1 离心5 min,弃去上清液, PBS 重悬细胞沉淀并涂片,进行细胞 分类。 3.肺组织病理学 取左肺组织用 4%多聚甲醛固定、脱水、石蜡包埋， 4 μm 切片，HE 染色。正常组支气管无明 显炎症细胞浸润，结构正常。哮喘组可见弥漫性细小支气管和血管周围炎性细胞浸润，其中嗜酸细胞 显著增多。气道上皮有不同程度脱落，支气管豁膜上皮杯状细胞增生，管腔内可见豁液栓及炎性渗出， 支气管平滑肌显著增厚，血管周围水肿。 4..细胞因子的检测： 模型组血清中IL-25 、IL-4 的含量显著高于对照组。采用ELISA 试剂盒检测血清中IL-25 、IL-4 的含量。 图1 小鼠哮喘模型雾化激发 图2 正常小鼠。肺支气管、血管及肺泡（↑）(HE 染色) 图3 哮喘小鼠。肺泡塌陷，间隔增宽，部分肺泡扩张（↑）(HE 染色) 图4 哮喘小鼠。血管壁显著增厚，周围炎性细胞浸润，其中嗜酸细胞显著增多 （↑）(HE 染色) 武汉云克隆诊断试剂研究所