生物化得学《蛋白质》教案15年教学整理.docVIP

第一章 蛋白质 教学基本要求 1. 了解蛋白质的生物学意义 2. 掌握蛋白质和氨基酸的组成、分类、结构及主要理化性质。 3. 掌握蛋白质结构与功能的关系。第一节 蛋白质概述 一、蛋白质的概念 蛋白质（protein）是由条或多条多肽链组成生物大分子蛋白质多肽链数百个氨基酸通过脱水缩合肽键形成各种氨基酸定的顺序排列蛋白质二、蛋白质的生物学意义 1.是生物体原生质含有蛋白质、核酸、糖类、脂类、水分和无机盐等化学成分，其中蛋白质约占细胞干重的一半或更多，人45%，皮肤63，肌肉80%，细菌52-80%，干酵母4606%。自然界存在一百亿种蛋白质，各种蛋白质都不尽相同，各自担负特殊的生物学功能。 2.是生物体的功能性物质 蛋白质是生命现象的物质基础，种类多样。造成蛋白质分子如此众多的原因是构成蛋白质分子的Aa种类、数量和排列顺序不同而引起的。 ① 催化作用——酶 ② 调节作用——激素一切激素受体和许多其他调节因子 ③ 运输作用——血红蛋白、膜蛋白④ 收缩作用——肌球蛋白、肌动蛋白、微管蛋白 ⑤ 免疫作用——IgG ⑥ 信息传递——味觉蛋白视紫红质遗传信息调控——组蛋白、阻遏蛋白、调节蛋白 血液凝固——血凝的酶和酶原 除此之外，蛋白质在高等动物的记忆、识别机构等方面部起着重要的作用。 一元素组成 根据纯品蛋白质的元素分析发现，蛋白质的元素有C（50-55%）、H（6-8%），O（20-23%）、N（15-18%）、S（0-%），有些蛋白质还含有微量的P、Fe、CuI、Zn、Mo等元素。各种蛋白质N的含量比较接近，平均为16%。因此，一般可通过测定生物样品中含N量来粗略地估算蛋白质的含量1gN相当于6.25g的蛋白质。 二单位组成——氨基酸（Aa）蛋白质其溶解度结构蛋白质是相对分子质量很大的生物分子，不同蛋白质的相对分子质量变化范围非常大，从约6 000到1×106 ，甚至更大。第节 一、氨基酸 氨基酸（Amino acid）是蛋白质的基本组成单位。生命界中数以万计的形形色色的各种功能蛋白质，正是由20种基本氨基酸经不同排列组合聚合形成。生物体的氨基酸绝大多数为α-氨基酸。由酸水解碱水解酶水解获取氨基酸的结构通式 共同点：① NH2和COOH都连在α-碳原子上，具两性性质； ② 除Gly外，其它Aa的α-碳原子都为不对称碳原子； ③ 不对称碳原子具旋光性，可使偏振光左转（-）和右旋（+）； ④ 不对称碳原子具立体异构构型，因此，α-Aa具有D-型和L-型两种异构体。通常以甘油醛的D-型和L-型来命名。天然的α-Aa均为L-Aa。注意构型与旋光方向没有直接的对应关系。 氨基酸的分类 生物体内20种-氨基酸极性极性Aa（12）极性极性极性极性Aa（） R的结构种芳香族氨基酸都吸收紫外光，在中性pH条件下，色氨酸和酪氨酸的紫外吸收峰在280nm，而苯丙氨酸的在260nm，大多数蛋白质中都含有色氨酸和酪氨酸或其中的种，常用测量280nm紫外吸收来蛋白质的浓度。乙醇和乙醚 3. 氨基酸由于不对称的碳原子，旋光性不对称碳原子有种构型不对称碳原子有种构型不对称碳原子L-胱氨酸、D-胱氨酸和内消旋胱氨酸。象胱氨酸这种由于分子内部2个不对称原子氨基酸旋光性α-氨基α-羧基氨基酸旋光性α-氨基酸 利用所给氨基酸分子的pKa1和pKa2及pH数据，即可判断出该分子占优势的离子形式，且能计算出在任何pH下某种氨基酸的各种离子的比例。 (三) 氨基酸的等电点 1. 概念（pI） 2. 求法 所以， 同理， 一氨基一羧基Aa，pI=[pK1(α-COOH)+pK2(α-NH2)]/2 一氨基二羧基Aa，pI=[pK1(α-COOH)+pK2(R- COOH)]/2 二氨基一羧基Aa，pI=[pK2(α-NH2)+pK3(R-NH2)]/2 结论：等于两性离子两侧的pK值之和之半。一般一氨基一羧基Aa 的pI都在pH6.0左右；一氨基二羧基Aa的pI较小，小于4；二氨基一羧基Aa 的pI较大，大于7。 3. 特性 溶解度最小，易沉淀 (四) 氨基酸的甲醛滴定 虽然氨基酸在溶液中以离子形式存在，氨基酸用于氨基酸的定量蛋白质水解程度α-氨基在碱性溶液中可与酰化试剂酰氯反应生成酰胺，反应 苄氧甲酰氯(Cbz-Cl)、叔丁氧甲酰氯(Boc-Cl)、对甲苯磺酰氯(Tos-Cl)、丹磺酰氯（DNS-Cl）与氨基酸反应生成酰胺α-氨基α-氨基在多肽合成中用氨基保护。5-二甲基萘-1-磺酰氯与氨基酸反应，生成DNS-氨基酸。DNS-氨基酸在酸性条件下6mol/L HCl 100℃也不破坏有强荧光，灵敏，分析α-氨基可与酸酐酰化试剂碱性溶液中反应生成酰胺在多肽合成中可用氨基保护。α-氨基用该反应来测定胰岛素的氨基酸序，DNFB称为Sanger