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第36卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第4期 Chinese 433—438 2008年4月 JournalofAnalyticalChemistry 蛋白质组学技术筛选与鉴定鲤鱼嗅脑急性创伤后的应激蛋白质 包晓东k2黄琳1’2 黄河清¨’2’3 蔡宗苇4 (1厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室， 2化学化工学院固体表面物理化学国家重点实验室，3化学生物学福建省重点实验室，厦门361005) 4(香港浸会大学化学系，香港) 摘要优化建立鲤鱼(cypfinuscarpio，cc)嗅觉端脑(嗅脑)全蛋白提取技术。联用低渗透裂解和液氮冻溶 tissueofcyprinus 法破碎鲤鱼嗅脑组织(rhinencephalon earpio，CCRT)、低速离心提取CCRT全蛋白，并采用双 目约为1200个。分别分离CCRT的脂溶性和水溶性全蛋白，并获得高分辨率的2D．PAGE图谱。选用差异蛋 白质组学技术筛选经10％冰醋酸创伤后的CC，其端脑组织所表达出的6种应激蛋白质，并用肽质量指纹谱 nlagS (peptide 蛋白和DNA链接酶IV，有望作为研究大脑急性创伤后的应激修复途径和机理的指示蛋白质。 关键词鲤鱼嗅脑，蛋白质组学，创伤，应激蛋白质，优化提取与分离 1 引 言 嗅觉神经通路是一个较为特殊的感觉通路，从感觉神经元到中枢神经期间的联系不经过血脑屏 障，使得外源物质有可能通过这条通路快速到达脑部。利用嗅觉神经通路实现向中枢神经快速供药是 目前神经药物科学发展的热点与难题之一。蛋白质组学已经逐渐演变成研究大脑中枢神经系统中的功 能蛋白质组成与结构，及参与信号传导途径与机理的重要手段之一[1以】，但有关嗅觉通路在特定条件 下，蛋白质的整体动态表达和执行生理功能的研究甚少。 目前，多数脑蛋白质组学研究对象局限于人类和小鼠等哺乳类动物口．4]，有关海兔大脑与口腔神经 节蛋白质组及相关多肽内切酶的组成与功能研究也引起学者的关注，它对进一步了解认知机理起着重 要的作用¨’51。有关鱼类脑组织的蛋白质组学的研究报道很少旧1，推测可能是因为缺乏高效提取与分 离脑组织全蛋白质技术。近期，2D—LC-MS系统拓展成为蛋白质组学研究有效分析手段之一【6卅，其蛋 白质分辨率可与采用固相pH梯度干胶条为第一向分离的双向凝胶电泳(2D—PAGE)方法相媲美一】。虽 然两者均具有高通量特点，但分析成本均较高。此外，样品中的混合蛋白质经反相HPLC分离过程中， 部分蛋白质在有机溶剂中易产生去折叠现象，并形成多种多聚体¨01。大量的研究指出，优化细胞或组 织全蛋白质提取与分离是开展蛋白质组学的关键实验步骤之一。在提取全蛋白质过程中，为了避免受 细胞或组织中丰富脂类物质、不稳定的蛋白质释放率和蛋白质之间的相互作用等因素干扰，通常选用亚 蛋白质组学的研究方法¨川。 鲤科是现存鱼类中最大的科，鲤鱼和斑马鱼是其中的代表物种，拥有丰富的研究信息背景。鲤鱼的 脑部相对发达，解剖结构清楚，各脑室易于分离，是良好的实验研究物种之一。本研究以鲤鱼嗅脑组织 而建立了适合于开展鱼脑蛋白质组学研究的分离方法，并用于筛选与鉴定脑组织表达的应激指示蛋白质。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 Reflex 2007-06-21收稿；2007-l1-04接受 本文系国家自然科学基金(No和厦门大学预研基金(No．xdkic资助项目。 ·E—mail：hqhuang@mU．edu．ca 万方数据万方数据 434 分析化学 第36卷 5～8(Amersham (CHAPS)(Amreseo公司)；载体两性电解质(carrierampholyte，CA)pH3～10