生物质谱技术和其在RNA检测中的应用.pdfVIP

综述与专论 生物质谱技术及其在RNA检测中的应用+ 李军” (北京大学实验动物中心北京100871) 摘要生命科学的需求促进质谱技术的发展，现代的质谱技术为生命科学研究提供丰 富的检测手段，本文重点介绍生物质谱技术的特点、性能以及质谱技术的进展；及质谱 技术在RNA研究领域的方法学，包括核酸的纯化方法、核酸的离子化技术、核酸的分 子量检测技术和核酸质谱数据的解析方法及其软件；以及质谱在核酸领域的具体应用， 包括质谱在测序、定量、转录后修饰、核酸的指纹识别、蛋白和核酸相互作用等方面的 应用。 关键词质谱技术RNA／蛋白相互作用核酸定量RNA转录后修饰RNA指纹技术 撞，把激光的能量传递给样品，从而导致样品的离 引言 子化【l】。它也是一种软电离技术，适用于混合物及 在过去的30年里，质谱技术尤其是测定生物 生物大分子的测定口】。 大分子的生物质谱技术有飞速的发展，电喷雾离子 质量分析器是质谱的核心，目前质谱的质量分 析器有四类：离子阱(IonTrap)、飞行时间(Time 化(ESI)和基质辅助激光解吸电离(MALDI)离 子化技术的发现为质谱的生物应用奠定基础；质谱 of 的分辨率、灵敏度、准确度也达到很高的水平，生 换离子回旋共振。它们在设计和构造上各有不同， 物质谱在蛋白、多肽领域得到广泛地应用，在核酸 因而各有优缺点。质量分析器决定整个机器的分辨 研究领域，质谱也逐渐发挥越来越重要的作用。下 率、质量准确性、敏感性和质量检测范围。离子阱 面分别介绍质谱技术、核酸的质谱检测方法以及质 质量分析器使用频率分离离子，具有中等的质量准 谱在核酸领域的应用。 确度，且测量的质量范围有限。傅立叶变换离子回 旋质谱使用频率分离离子，具有很高的质量准确度 1质谱技术简介 和分辨率，但傅立叶变换离子回旋质谱价格昂贵、 质谱是测定物质分子量的工具，简单地说，质 仪器操作复杂。飞行时间分析器使用时间和距离分 谱的操作部件由软件和硬件两部分组成。硬件主要 离离子，具有较高的质量准确度和分辨率，测量的 包括三个核心硬件，分别为样品离子化、质量分析 质量范围大。四极杆质量分析器使用频率分离离子， 器(M／Z)和离子检测器；软件部分包括机器的控制具有较低的质量准确度和分辨率，且测量的质量范 和质谱数据的分析处理。 围有限。这些质量分析器的发明促进质谱的应用。 样品离子化有多种方法，在过去的20多年， 近10年来，质谱的重要进展体现在两个方面： 质谱领域的重大进展之一就是ESI和MALDI离(1)质谱技术的第一个重要进展就是开发串联质谱， 子化方法的发现，可以在比较温和的条件下产生 就是对上述质量分析装置进行不同的组合，以达到 离子，这大大促进质谱在生物领域的应用。ESI和 特异性的目标；(2)质谱另一个重要进展不是在于 技术层面上，而是在仪器化方面，商业化的仪器推 MALDI离子化的原理在文献[1]中已经详细的介 绍，这里不再详述。电喷雾离子化的特点是产生多 动质谱在应用领域里的快速发展。各厂家为满足客 电荷离子，使质量电荷比(m／z)降低到多数质量户的需要，尤其是生命科学领域的需要，组合不同 分析仪器都可以检测的范围，因而大大扩展分子量 的特殊电离技术以及各种质量检测器，生产出超高 的分析范围口