关于磁珠分离的生物质谱技术用于急性白血病疗效评价.pdfVIP

第38卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报 第2期 Chinese of 2010年2月 Journal Chemistry 233～236 Analytical 基于磁珠分离的生物质谱技术用于急性白血病疗效评价 梁婷婷1 王娜2 王冠军1 李爱玲2 何 昆2 王杰2 崔久嵬1 李燕2 李薇¨ 1(吉林大学第一医院血液肿瘤科，长春130021)2(国家生物医学分析中心，北京100850) 摘要基于磁珠分离的生物质谱技术，建立急性白血病疗效的血清评价方法。通过对质控血清的连续检测 分析，13间及日内重复性均达国际标准，确保血清多肽分析体系的稳定性及可靠性。以30例初发急性向血病 血清及其治疗缓解血清为研究对象，经金属铜鳌合磁珠分离和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MAL- 1000— DI—TOF—MS)检测后获得血清多肽谱图。经过FlexAnalysis2．4软件和Biosun—MS软件分析，在m／z 10000范围内，得到27个具有统计学意义(PO．05)的差异峰，其中治疗缓解后表达上调峰10个，表达下调 峰17个，利用上述差异峰建立的诊断模型获得了100％敏感性和90％的特异性。基于磁珠分离和MALDI— TOF—MS检测建立的诊断模型具有较高的敏感性和特异性，对差异峰进行测序鉴定将有助于急性白血病疗效 评价和发病机理研究。 关键词磁珠；质谱；急性白血病；治疗 1 引 言 急性白血病(Acute 髓形态学、免疫学、细胞遗传学及分子生物学方法的联合应用对此病进行诊断。诱导治疗后，通过骨髓 形态学分析进行早期疗效评价，以指导进一步治疗和预后评价。鉴于骨髓形态学分析创伤性大、耗时 长，目前尚缺乏一种无创、省时、灵敏度和特异性较高的血清学评价方法。本研究采用基于磁珠分离和 MALDI—TOF．MS检测的血清多肽分析技术，旨在发现可用于评价急性白血病疗效的血清多肽标志物，根 据病人对治疗的早期反应，判断疗效及预后评价。血清多肽诊断技术通过多个差异多肽联合进行诊断， 弥补了传统单一诊断标志物敏感性和特异性不足的缺点。 2 实验部分 2．1仪器、试剂与材料 acid，HCCA]和混合标肽均购自Bruker公司。 30例急性白血病血清：采自吉林大学第一医院血液肿瘤科，经形态学、免疫学、细胞化学以及细胞 遗传学分析确诊病例。治疗缓解血清：上述30例病人治疗2个疗程达血液学完全缓解。以上30例患 无其它自身免疫性疾病、心肝疾病及恶性肿瘤(见表1)。 2．3实验方法 采集受试者清晨空腹静脉全血5mL(不加抗凝剂)，室温静置30min后，以2000r／min离。015min， 将上层血清取出并分装，冻存于一80℃冰箱。实验时，样品常温解冻，待用。 2009-07-08收稿；2009429-24接受 (No．2008BAKl4804)，新药创制项目(No．2009ZX09301-002)资助。 ·E—mail：drweih@yahoo．com 万方数据万方数据 分析化学 第38卷 表l急性白血病样品临床病例资料 Tablel Clinical of withacuteleukemia characteristics patients 将纳米金属螯合磁珠(自制)混匀，取5恤L磁珠加入50斗L结合液放在磁珠分离器上，移动10次， 弃去上清液，此步骤重复3次；再加入20止结合液和5止血清，混匀，室温下放置10min；将Eppendoff 管放在磁珠分离器上20s后，除去上清液，加入100斗L洗涤液，前后反复10次，弃去上清液，此步骤重 s，将