3~样品的采集与管理.ppt

依据 《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》中华人民共和国卫生行业标准 WS 293-2008 《艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南（试行）》（中国疾病预防控制中心，2006年2月） 《HIV-1病毒载量测定及质量保证指南（试行）》（中国疾病预防控制中心，2008年2月） 《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》，卫生部第45号令 2006年2月1日 《病原微生物实验室生物安全管理条例》中华人民共和国国务院令（第424号）2004年 《全国艾滋病检测技术规范》2009年修订版 全国艾滋病检测技术规范 4.1.1 样品的编码和记录 4.1.2 应制定样品编码的标准操作程序（SOP），规定样品编码的原则和方法，为样品制定唯一性编码（编号），保证其唯一性。 样品种类及相应的用途 1、 全血、血清、血浆、唾液、尿液以及DBS样品可用于HIV抗体检测。 2、抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定。 3、血浆可用于HIV-1病毒载量、基因型及耐药检测。DBS样品可用于HIV-1基因型及耐药检测。 4、全血、血浆、淋巴细胞富集液、外周血淋巴细胞（PBMC）及DBS样品可用于HIV核酸的定性检测。 5、PBMC、全血、淋巴细胞富集液等可用于HIV-1分离培养。 要求 1、如何采集合格的血样？ 2、用什么容器收集血样？ 3、采用何种方式运输？ 4、运输容器要求？ 5、如何储存？ 样本采集前准备物品 操作程序（采集血液样品 ) 1. 辨认静脉血管： a)? 使用非扎针采血的手的食指 b)? 用“按压－释放”的动作分辨血管或结缔组织 c)? 确定柔软而有弹性的静脉血管的位置 2.? 触摸检查静脉血管： a)? 同样使用非扎针采血的两根手指，一般用食指和中指 b)??从不同侧面触摸检查静脉血管 c)? 估定血管滑动的程度 3.? 消毒皮肤： a)? 用70%乙醇擦拭皮肤 b)? 让皮肤在空气中干燥 4.? 取组合器械： a)? 戴上两只新手套 b)? 用拇指、食指和中指握住针头固定器的上部 c)?用无名指和小指拿住采血管 d)?握住针头固定器，保持水平状态 e)?针头的斜面必须向上 采集病原微生物样本应当具备下列条件 (一)具有与采集病原微生物样本所需要的生物安全防护水平相适应的设备； (二)具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员 (三)具有有效的防止病原微生物扩散和感染的措施 (四)具有保证病原微生物样本质量的技术方法和手段。 (五)采集高致病性病原微生物样本的工作人员在采集过程中应当防止病原微生物扩散和感染，并对样本的来源、采集过程和方法等作详细记录。 静脉血的采集 抽血过程中注意事项 ①避免溶血。器皿不清洁，不干燥；凝血时间长；损伤组织过多；抽血太快；注血时未取下针头或产生大量气泡；过分振荡；离心速度过高均可导致。 ②抽血前应检查针头是否锋利或带钩，是否接牢，有无阻塞和漏气。 ③抽血时进针不要过深，以免造成皮下血肿。 ④抽血时，只能外抽不能内推，以免形成气栓，造成严重后果。 ⑤采血后发生眩晕，可让其平卧休息片刻即可恢复，也可拇指掐人中和合谷穴。 ⑥吸取血清时必须用一次性吸管，否则易发生交叉污染。 ⑦用于HIV抗体筛查和确认试验送检的血清量以１～2ml为宜，最低不应少于100ul，否则无法进行正常检测。 采集样本的注意事项 保障工作人员、病人和环境的安全 保证样品的质量（避免溶血、及时分离血清、合理的存放） 样本的正确标示（编号与登记表一致） 职业暴露的预防 针头处理 血液标本采集过程中的注意事项: 止血带结扎过久 抽血时病人攥拳的影响 肌肉组织是代谢最活跃的组织，病人握拳加速钾从细胞溢出的速率 握拳一分钟，血清钾浓度增加1～1.5毫摩尔/升，可由正常的血清钾浓度（如4.0毫摩尔/升）升高到5.5毫摩尔/升为高钾血症。 抗凝剂对实验结果的影响 当血液与EDTA-Na2抗凝剂的比例为1∶4以上时不影响, 当血液与EDTA-Na2抗凝剂的比例不恰当时对抗-HIV ELISA实验结果影响颇大.提示EDTA-Na2抗凝剂可促使OD值读数升高,其中可能原因是抗凝剂中的枸橼酸钠或EDTA-Na2与酶结合物的Fe络合的结果 抗凝剂对实验结果的影响 抗凝剂又与纤维蛋白中的Ca结合,这样导致结合的大分子(酶-Fe-抗凝剂-Ca+-纤维蛋白)与微板结合力增强,导致检测OD数值升高 当EDTA浓度达2.5毫克/毫升，嗜中性粒细胞肿胀，核分叶溶解，影响细胞的分析；血小板肿胀、崩解、产生正常血小板大小的碎片，使血小板计数假性升高。 建议尽量不用肝素抗凝剂 血液凝固原因 ①血流不畅，造成血液在血管内或注射器内凝固 ②抗凝剂量不