高中生物 第一章 基因工程 第一节 工具酶的发现和基因工程的诞生学案 浙科版选修3.docVIP

第一章 基因工程 第一节 工具酶的发现和基因工程的诞生 基因工程的操作离不开工具酶。限制性核酸内切酶和DNA连接酶为基因的分离和重组提供了必要的条件，而载体又是将外源基因送到细胞中的必要工具。基因工程的核心是构建重组DNA分子，因此，基因工程又叫重组DNA技术。 一、限制性核酸内切酶(restriction endonuclease) 1．主要来源 限制性核酸内切酶简称限制酶，主要存在于微生物中，多数是从细菌中分离纯化出来的。 2．作用 限制酶能够识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列，并且能够使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。限制酶主要切割外源DNA，而对自身的DNA不起作用，以达到保护自身的目的。 被限制酶切开的是磷酸二酯键，而不是碱基间的氢键。 3．特点 限制酶具有专一性，即一种限制性核酸内切酶只能特异性地识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列，而且只能切割特定的位点。 4．结果 DNA分子经限制性核酸内切酶作用后会形成DNA片段。 例如从大肠杆菌中发现的一种限制性核酸内切酶只能识别GAATTC序列，并能在G和A之间将这段序列切开。限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开形成粘性末端(见上图)。此为错位切，一般是在两条链的不同部位切割，中间相隔几个核苷酸，DNA被同一种限制酶切开后形成的两个粘性末端是互补的。 如下图所示，不同限制酶识别的D