发酵工艺综合实验(通风模块)讲义.docVIP

生物工程学院 2004.10 第一部分 基础实验（分析检测方法） 实验一 淀粉质原料的水分测定 2 实验二 原料中粗淀粉的测定 3 实验三 还原糖的测定 7 实验四 柠檬酸的检测 9 实验五 蛋白酶活力的测定方法 11 实验六 α-淀粉酶的测定方法 13 实验七 糖化酶的测定方法 15 实验八 高效液相色谱法苹果酸 17 第二部分 专业实验 实验九 玉米淀粉化糖化 面包酵母流加培养与分批培养试验实验黑曲霉发酵生产柠檬酸实验 水分在工业发酵中是一个极为重要的分析项目。原料中水分，对原料的品质与保存关系甚大。水分过高，原料在贮藏时容易发霉变质，影响原料的利用价值。 水分测定方法一般采用烘干法，即在100-105℃烘箱中直接干燥。 1 原理 样品中的水分受热后产生的蒸汽压，高于空气在电热干燥箱中的分压，水分便从样品中挥发出来。样品干燥的速度取决于这个压差的大小，在此条件下失去的主要是试样中的游离水。试样的水分一般是指在100℃左右直接干燥的情况下，所失去的总量。在此条件下失去的重量不仅是水分，还有微量的挥发性物质。 2 仪器与设备 （1）分析天平 （2）称量瓶 （3）干燥器 （4）电热恒温干燥箱 3 测定步骤 准确称取约2克试样，置入经100-l05℃干燥恒重后的称量瓶中，在100-105℃烘箱中干燥3-4小时，取出，置入干燥器中冷却至室温，称重。再于相同温度下干燥1小时左右，同上操作，直至恒重。 计算 式中 W0：称量瓶重（g） W1：干燥前试样与称量瓶重（g） W2：干燥后试样与称量瓶重（g） 4 说明 （1）原料的水分测定一般需采用100-105℃烘箱中直接干燥，其结果较为准确。对生产过程中的水分快速测定，可采用更高温度下干燥(如120-140℃)或红外灯下干燥，以缩短分析时间。 （2）测定水分时，称量恒重指试样连续两次干燥后，称量之差不超过2mg。 5 参考书 （1）天津轻工业学院等，《工业发酵分析》，轻工业出版社，1980年 实验二 原料中粗淀粉的测定 1 原理 淀粉经酸或水解生成葡萄糖： 所生成的葡萄糖用斐林试剂测定。 斐林试剂由甲、乙液组成。甲液为硫酸铜溶液，乙液为氢氧化钠与酒石酸钾钠溶液。平时甲、乙液分别贮存，测定时甲、乙液等体积混合。混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀： 2NaOH+CuSO4=Cu(OH)2↓+Na2SO4 所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钾钠反应，生成酒石酸钾钠铜络合物，使氢氧化铜溶解： 酒石酸钾纳铜络合物中二价铜是一个氧化剂，能使还原糖中羰基氧化，而二价铜被还原生成一价的氧化亚铜沉淀： 反应终点用次甲基蓝指示剂显示。因次甲基蓝氧化能力较二价铜弱，故待二价铜全部被还原后，过量一滴还原糖立即使次甲基蓝还原，溶液蓝色消失以示终点： 2 试剂 2.1 斐林试剂 甲液：称取69.3克硫酸铜(CuSO4·15H2O)，用水溶解并稀释至1000毫升，如有不溶物可用滤纸过滤。 乙液：称取346克酒石酸钾钠，100克氢氧化钠，用水溶解并稀释至1000毫升。 2.2 2％盐酸溶液 量取4.5毫升浓盐酸，用95.5毫升水稀释。 2.3 20％盐酸溶液 量取20毫升浓盐酸，缓慢倒入80毫开水中。 2.4 20％氢氧化钠溶液 称取200克氢氧化钠，用水溶解并稀释至1000毫升。 2.5 1％次甲基蓝溶液 称取1克次甲基蓝，加100毫升水，加热溶解，贮存于棕色瓶中。 2.6 0.2％标准葡萄糖溶液 准确称取2克无水葡萄糖(预先于100~l05℃烘干)，用水溶解，加5毫升浓盐酸，用水定容至1000毫升。 3 仪器与设备 （1）三角瓶 （2）长玻璃管(约1米) （3）容量瓶 （4）分析天平 （5）干燥器 （6）电热恒温干燥箱 （7）滴定管 （8）称量瓶