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第一章 组织学绪论 一、组织学技术简介 组织学技术种类繁多，每一类技术又含有许多分之技术，其原理涉及物理、化学、生物化学、免疫学、分子生物学等学科的知识。随着科学技术的发展，研究组织学的技术也在不断更新，熟悉这些研究技术，对学好组织学将有很大的帮助，并可以为以后的科学研究打下良好基础。 ㈠光镜技术 光学显微镜是一种既古老又常用的观测工具。最好的光镜其分辨率约为0.2μm，可将物体放大1500倍。借助光镜看到的细胞组织的微细结构称光镜结构。在应用光镜技术时，需把组织器官制成切片，以便看到组织和细胞的内部结构。 1.制片方法的种类 ⑴切片标本：是组织学研究中最为常用的基本方法。根据所用支持物不同，可分为石蜡包埋切片、火棉胶包埋切片和冰冻切片，尤以石蜡包埋切片最常用。 ⑵铺片标本：将膜状组织如大网膜、皮下组织、神经丛等展开后平铺于载片上制成的标本。主要观察各种结构的整体形态和微细结构。 ⑶涂片标本：将液态的成份如血液、骨髓或精液等直接涂于载片上制成的标本。主要用于观察其中细胞的形态和微细结构。 ⑷磨片标本：不经脱钙而直接磨片制成的标本，如骨磨片、牙磨片等。 ⑸分离标本：将极小的组织块浸入分离液中，溶去其细胞间质，采用机械分离法（如振荡、针拨等）使之分离成单个而完整的细胞，如肌纤维、神经元等。 ⑹压片标本：组织经药物软化、染色、撕碎后，用盖片压平于载片上所制成的标本，如运动终板、肌梭等。 ⑺活体标本：指光镜下直接观察活细胞或活组织形态和运动的标本。如将蛙的口腔粘膜取下放于载片上，滴加生理盐水（0.64%NaCl水溶液）以观察其纤毛运动。 ⑻血管注射标本：将卡红、普鲁士蓝、墨汁等染料加明胶配制成染液注入到血管内，如肝、肾、肺、小肠等血管注射切片，以观察其血管的分布特点。 ⑼整体装片标本：将很小的动物或早期胚胎制成标本，如鸡胚，可以观察胚体的表面立体形态特征。 2.制作组织切片的方法简介 组织标本的各种制片方法在具体操作上虽有所不同，但其一般程序是基本相同的，把各种制片方法归纳为切片法和非切片法两大类，将其主要操作程序列表介绍如下。 组织切片制作方法简介： 3.几种常用的染色方法 在自然状态下，绝大多数组织是无色不透明的，需用相应的方法制成薄片，再经过染色和透明后才能在显微镜下观察。最常用的方法是石蜡包埋切片、经苏木精—伊红（Hematoxylin-eosin staining）染色，简称HE染色法。现详细介绍此种常规制片的制作过程，并列举其他几种常用的特殊染色法，使学生能举一反三，对实验中所观察组织标本的染色和制作过程有所了解。 ⑴石蜡包埋切片与苏木精—伊红染色法 ①取材：所取组织愈新鲜愈好，并迅速投入固定液中。组织块厚度不应超过1.0cm。 ②固定：固定的目的是保持组织细胞原本的形态结构，使其与生活时相似，防止自溶与腐败。常用的固定液有Zenker液、10%福尔马林（甲醛）、Bouin液等。组织块与固定液的比例为1：20，固定时间为24小时。 ③水洗与修整：组织块经固定后将受挤压和多余的部分修剪整形，同时选择好包埋面。然后流水冲洗24小时，洗去多余的固定液，以免影响染色效果。 ④脱水与透明：将组织内水分全部除去的过程称为脱水。常用的脱水剂是不同浓度的系列酒精。脱水时从低浓度酒精逐步转入高浓度酒精（50%→70%→80%→90%→95%→100%各级酒精），以防止组织过度收缩而变形。透明的目的是使组织中的酒精被透明剂替代而利于浸蜡和包埋，常用的透明剂有二甲苯、氯仿等。 ⑤浸蜡和包埋：将已透明的组织块移入熔化的石蜡内浸渍即为浸蜡。其目的是借助组织中的透明剂，使石蜡浸入组织块，获得一定的硬度，以便切成薄片。把已透明的组织块放入蜡杯(Ⅰ)→蜡杯(Ⅱ)→蜡杯(Ⅲ)，浸蜡时间视组织块大小而定，一般总浸蜡时间为2～4小时，均在恒温箱内进行。将浸蜡后的组织块包埋于石蜡中，并使之凝固成蜡块的过程称为包埋。把浸蜡后的组织块放在52～58℃的熔化石蜡中（一定形状的容器），使之凝固其中做成蜡块，便于切片。 ⑥切片、裱片和烤片：用切片机将包含组织的蜡块切成5～7μm厚的薄片。将蜡片粘贴在载玻片上即裱片。目的是将石蜡切片粘附在载玻片上，以便染色。方法是用小镊子将蜡片放在37～40℃的温水面上，待完全展平后持涂有蛋白甘油的载玻片将其轻轻捞起，然后放在烤片架上，置于37℃左右温箱内烤24小时。 ⑦脱蜡和复水：将烤干的切片放入二甲苯（I）、二甲苯（II）各5～10分钟，以溶去切片上的石蜡。将脱蜡后的切片经各级不同浓度的酒精逐步下降一直到水。即从二甲苯（II）中取出的切片放入100%、95%、90%、80%、70%等各浓度的酒精，使组织逐步重新充满水分，在各浓度酒精中分别停留5～10分钟，然后用蒸馏水洗去酒精即可染色。 ⑧染色：将蒸馏水洗涤后的切片移入苏木