软骨素提取方案汇总.doc

硫酸软骨素提取 方案一：稀碱-酶解提取法 软骨—煮沸4-6h（80℃）—与2% NaOH混匀（1：6.25）—提取1.5h—调  滤液 pH（HCl，6-6.5）—过滤 滤渣——与2%NaOH混匀（1:0.12）—提取1h 合并滤液—调pH（8.0-9.0）—加入胰酶（1000:0.5）—水解1h—加入胰酶（1000:0.5） —水解1.5h—加高岭土和活性炭吸附（用硅藻土代替）—氯仿萃取—取水层调 pH6.8-7.2—95%乙醇沉淀（2.5倍）—软骨素 步骤：先将软骨在80℃水中煮4～6h，然后按原料（干质量）与2%氢氧化钠的比例为1∶6.25的量加入氢氧化钠溶液，室温提取1.5h，然后用盐酸调pH到6～6.5，双层纱布过滤；留下滤液，滤渣再以1∶0.12 的质量比加入2%的氢氧化钠溶液，于40℃下提取lh，再用双层滤布过滤；弃滤渣，取滤液。合并2次滤液，并测量体积待用。滤液调节pH到8.0～9.0，按滤液与胰酶1000∶0.5的比例加入胰酶，于40～50℃水解lh 后，再按1000∶0.5的质量比加入胃蛋白酶，40～50℃水解1.5 h，过滤后加入高岭土和活性炭吸附。用氯仿反萃取法萃取滤液，留水层。 调水层pH至6.8～7.2，再加入2.5倍体积的95%以上乙醇沉淀，即得硫酸软骨索。 软骨—煮沸4-6h（80℃）—与1mol/L NaOH混匀（1：2）—搅拌提取2h（45℃）碱提取的最佳条件是按软骨与1 mol/L氢氧化钠溶液质量比1∶2混合，温度控制在45℃，搅拌提取2h。复合酶酶解工艺的适宜条件为按复合蛋白酶与料液1∶1000的质量比加入蛋白酶，控温40～50℃，保持溶液pH 8.5～9.0，水解4h。在最佳试验条件下，得到硫酸软骨素为白色粉末，产品纯度达95.2 %，收率为32.6%。把猪软骨预处理后，以骨粉1∶3的比例加入去离子水，加入原料量1%的复合酶，于55℃搅拌酶解12 h。复合酶水解液用盐酸调pH7.5，加入2%的醋酸钠溶液，搅拌溶解后，升温到85℃，保温20min，过滤去残渣。滤液加入胰酶酶解. 经酶解后的酶解液在85℃下维持15min，过滤，乙醇沉淀，干燥磨粉后得成品。影响该工艺水解反应的因素为酶解温度50℃、pH 8.6～8.9值与加酶量0～39L。2O2, 0.5 h,75℃， 5min）—过 滤—95% 乙醇第二次沉淀—乙醇脱水—恒温干燥——成品 步骤：干燥软骨室温(25℃)浸泡 24 小时,80℃恒温 0.5 小时后捞出,清洗,－ 20℃速冻保存。实验时,取冻软骨粉碎,以 100g/ 份分装于烧杯中,另取一份在 70℃～80℃恒温干燥至恒重,测湿骨粉含水量。按 1∶1.5 的料液比加入去离子水,分别加入原料 1% 的碱性蛋白酶,调 pH 值至对应最适作用范围,50℃搅拌酶解 2 小时,直到残渣是总量的 20% 左右时倒去上清液,残渣中再加入 0.5% 的碱性蛋白酶,再调 pH 值至对应最适作用范围,50℃搅拌酶解 1 小时。滤去残渣,将 2 次酶解液混合,50℃恒温 1 小时,调 pH 值至 7.5,加入2% 的 NaCl 和 2% 的胰蛋白酶进行酶解和盐。55℃恒温 0.5 小时后,80℃恒温 5 分钟灭酶。立即过滤。调 pH 值 6.5,用 95% 乙醇调至乙醇终浓度至 69%,静置 12 小时以上。去掉上清液,用 10 倍体积去离子水溶解沉淀,加 1% 的 H2O2,脱色 0.5 时,75℃恒温 5分钟。过滤,滤液用 95% 乙醇第二次沉淀(调乙醇终浓度至 69%),去掉上清液,再用乙醇脱水 2 -3 次,80℃恒温干燥至样品含水率为 10% 时得成品。