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三聚氰胺快速检测卡灵敏性与重复性验证 　　【摘 要】目的：对市面销售的不同厂家生产的胶体金免疫层析法三聚氰胺快速检测卡的准确性进行评价。方法：制备三聚氰胺加标样品，选取部分不同厂家生产三聚氰胺快速检测卡进行检测，对照LC-MS/MS法验证其灵敏性和重复性。结果：灵敏性，批内重复性，批间重复性满足要求的快速检测卡比率分别为80.0%，66.7%，73.3%。结论：65%以上厂家生产的三聚氰胺快速检测卡灵敏性和重复性能够满足要求。 【关键词】移动实验室；三聚氰胺；快速检测卡；灵敏性；重复性 1、引言 移动实验室作为一种可移动、快速的检验平台，已经在突发公共安全事件及食品安全日常保障方面发挥出越来越多的作用1-3。在其搭载的多种快速检测装备中，三聚氰胺快速检测卡是必不可少的一个4-6。目前常用的三聚氰胺快速检测卡主要采用胶体金免疫层析法，其原理是以条状硝酸纤维素膜（NC膜）为固定相，预包被偶联抗原，借助毛细作用使样品溶液在NC膜上泳动，样品中的三聚氰胺即与NC膜上的三聚氰胺抗体发生高特异、高亲和性的免疫反应，抑制抗原与三聚氰胺抗体结合，层析过程中产生的免疫复合物被富集或截留在NC膜的检测带内，通过酶促显色反应或使用可目测的着色标记物（如胶体金），3-5分钟便可得到直观的检测结果。该方法操作简便、反应快速、结果直观，价格低廉，已成为移动实验室最常用的三聚氰胺筛选方法7-9。现今国内生产销售胶体金三聚氰胺快速检测卡的企业很多，其产品的灵敏性和稳定性直接影响到样品筛选结果的准确性，本文选取了15种不同生产厂家的三聚氰胺快速检测卡对照GB/T22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》10中的第二法：液相色谱-质谱/质谱法对其灵敏性和重复性进行验证。 2、材料与方法 2.1材料与试剂 2.1.1胶体金三聚氰胺快速检测卡：随机选取15种不同生产厂家的产品，依次标记为卡1，卡2，…，卡15。随检测卡附含样品稀释液2mL，一次性吸管1支。 2.1.2Waters Oasis MCX固相萃取小柱：美国Waters公司。 2.1.3三聚氰胺标准品：美国Supelco公司。准确称取100mg（精确到0.1mg）三聚氰胺标准品于100mL容量瓶中，用1：1甲醇水溶液溶解并定容至刻度，配制成浓度为1mg/mL的标准储备液，于4℃避光保存。 2.1.4实验用水均为美国Millipore公司Milli-Q实验室超纯水器制备，满足实验室用水一级水要求。 2.1.5Acquity UPLC液相色谱-质谱联用仪：美国Waters公司。 2.2样品处理 吸取一定量三聚氰胺标准储备液加入到容量瓶中，用液态乳（乳粉样品按照说明书比例加水复原）定容，混匀，即可得到三聚氰胺加标样品。 2.3实验条件 液相色谱-质谱/质谱法按GB/T22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》操作；胶体金三聚氰胺快速检测卡按各自说明书操作。 3、结果与讨论 3.1灵敏性 按照不同生产厂家三聚氰胺快速检测卡各自的检测限要求，按照2.2步骤制得相应浓度的三聚氰胺加标样品采用液相色谱-质谱/质谱进行检测确认三聚氰胺含量，然后用三聚氰胺快速检测卡重复测定20次（N=20），统计检测卡阳性结果数（n）计算灵敏性=n×100%/N，结果见表1。 按照灵敏性≥95%作为合格判断标准，能够达到说明书标示的灵敏性要求的三聚氰胺快速检测卡数量为12种，占总样本数量的80.0%。 3.2重复性 以检测限+20%浓度为阳性样本，检测限-20%浓度为阴性样本，按照2.2步骤依不同生产厂家三聚氰胺快速检测卡各自的检测限要求，制得三聚氰胺阳性样品、阴性样品各一份，采用液相色谱-质谱/质谱进行检测确认三聚氰胺含量，再用三聚氰胺快速检测卡分别平行检测20次（N=20），统计检测卡阳（阴）性结果数（n）计算批内重复性=n×100%/N，结果见表2。取三聚氰胺阳性样品、阴性样品连续20天（N=20）每天各测定1次，统计检测卡阳（阴）性结果天数（n），计算批间重复性=n×100%/N，结果见表3。 对照表1，按照重复性≥95%作为合格判断标准，对于阳性样品和阴性样品均能够达到批内重复性要求的三聚氰胺快速检测卡数量为10种，占总样本数量的66.7%。对于阳性样品和阴性样品均能够达到批间重复性要求的三聚氰胺快速检测卡数量为11种，占总样本数量的73.3%。 4、结论 综上所述，三聚氰胺快速检测卡操作简单，不需大型仪器设备，耗时短且费用低，是移动实验室检测三聚氰胺的主要方法。大部分厂家生产销售的三聚氰胺快速检测卡灵敏性和重复性能够满足要求，但仍有部分厂家的产品质量有待改进，何让“