利用荧光共振能量转移技术在活细胞内研究顺铂诱导凋亡信号通路.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2009, 36(9): 1172~1179 用荧光共振能量转移技术在活细胞内研究顺铂 诱导的凋亡信号通路* ** 刘镭 张英杰 汪献旺 (华南师范大学生物光子学研究院激光生命科学研究所，激光生命科学教育部重点实验室，广州5 10631) 摘要 为在活细胞内探讨顺铂诱导的凋亡通路 实验样品经顺铂处理后，应用基于荧光共振能量转移(FRET)原理设计的荧光 探针pFRET-Bid 和pSCAT-3 来检测Bid 切割和Capase-3 活化的动态变化，同时，利用荧光成像在亚细胞水平对Bid 转位线 粒体的动力学特征进行了实时分 结果表明：在顺铂诱导的细胞凋亡过程中，Bid 切割发生在药物刺激后4 ～5 h，历时 (120 20) min Bid 切割活化后即从胞浆内转位到线粒体，历时(90 15) min 在凋亡后期，可以明显检测到Caspase-3 的激 活 研究表明，应用FRET 及荧光成像技术，可以在活细胞内实时、直观、可视地研究顺铂诱导的细胞凋亡过程，从而客观 地反映了Bid 、Caspase-3 等蛋白质分子在该凋亡信号通路中的动态行为及时空传递特性 关键词 荧光共振能量转移，顺铂，细胞凋亡，Bid ，Caspase-3 学科分类号 R735.7，Q78 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2009.00067 荧光共振能量转移(fluorescence resonance 切割形成tBid，tBid 转位到线粒体诱导线粒体的外 energy transfer，FRET) ，是指能量从一种受激发的 膜破裂[21～25] Caspase 家族蛋白在调节凋亡时也起 荧光基团以非辐射的方式转移到另一荧光基团的物 关键作用[26, 27] 一般认为，Caspase-3 是哺乳动物 理现象[1～3] FRET 的有效响应距离一般在1～10 nm. 细胞凋亡发生的关键酶[10, 11, 28] ，一旦被激活，凋亡 基于其原理及特点，FRET 技术成为对生物大分子 常难以避免 因此，Caspase-3 被作为细胞凋亡的 之间相互作用检测的一种有效方法[4～9] 近几年， 标志 我们应用该技术对细胞凋亡、细胞增殖、肿瘤治疗 本研究工作中，为了在活细胞内进一步探讨顺 过程中各蛋白质分子间的相互作用及分子信号转导 铂诱导凋亡的分子机制，我们应用基于FRET 原理 进行了重点研究，并取得了一定进展[7～17] 设计的荧光探针pFRET-Bid 和pSCAT-3 分别检测 顺氯氨铂，简称顺铂，是多种恶性肿瘤的一线 Bid 切割和Capase-3 活化的动态变化 同时，利用 化疗药物，其抗癌谱广，属细胞周期非特异性药 荧光成像在亚细胞水平对Bid 转位线粒体的动力学 物[18～20] 研究表明，顺铂通过与DNA 分子形成链 特征进行了实时分 因而，我们在无损伤、活细 内或链间交叉联接或阻止RNA 分子再复制等途径 胞生理条件下实时、直观、可视地研究了顺铂诱导 发挥抗肿瘤作用，同时它还能影响蛋白质翻译、细 的细胞凋亡过程，获得了Bid、Caspase-3 等蛋白质 胞周期、细胞凋亡等胞内活动[19～21] 目前，关于其 分子在该凋亡信号通路中的动态行为特性，进一步 药理作用及导致肿瘤耐药性的具体分子机制尚不完 深化对顺铂抗肿瘤作用机制的认识 全清楚 研究施药后细胞内各蛋白质分子的动态行 为将有助于深入认识顺铂抗肿瘤的药理机制，为临 * 教育部 “长江学者与创新团队计划”创新团队项目(IRT0829), 床治疗提供可靠的理论参考 国家自然科学基金 3087