2014胶东地区健康禽源大肠埃希菌耐药性与整合子-基因盒携带分析.pdfVIP

动物医学进展 ，2014，35(10)：66—70 ProgressinVeterinaryM edicine 胶东地区健康禽源大肠埃希菌耐药性与整合子 基因盒携带分析 刘红玉 ，王君玮 ，王 娟 ，赵思俊 ，黄秀梅 ，李玉清 ，曲志娜 (1．中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032；2．东北农业大学，黑龙江哈尔滨 150030) 摘 要 ：为 了解健康禽源大肠埃希茵的耐药性及其 I型和 Ⅱ型整合子携带情况和流行特征，探讨整合子 与大肠埃希菌耐药表型的相关性 ，分析整合子在细菌多重耐药 中的作用，采用 MIC法和PCR方法分别检测 249株健康禽源大肠埃希菌的耐药性和工型、Ⅱ型整合酶基因及可变区。结果显示 ，12种药物耐药率均超过 56．63 ，多重耐药率高达 98．39 ；245株多重耐药菌株均含有 I型整合子，但含有 Ⅱ型整合子的大肠埃希 茵仅 113株 ，工型和 Ⅱ型整合子的检出率分别为 i00％和46．12 ；63．759／6的工型整合子阳性菌株扩增 出5 类大小不同的基 因盒，大小为 1000bp～2300bp，18．6 的 Ⅱ型整合子阳性菌株扩增 出2200bp的基 因盒 ； 58．82 的菌株携带 2种或 2种以上的基 因盒 ，基 因盒以编码 甲氧苄啶类和氨基糖苷类药物耐药性 的dfrA 和 aadA基 因家族为主 ，其中aadA22为优势基 因盒，其次是 dfrA17+aadA5基 因盒 。说 明胶 东地 区禽源大 肠埃希菌多重耐药现象严重；I型整合子比Ⅱ型整合子更流行 ；工型和 Ⅱ型整合子参与 多重耐药，但细菌携 带的整合子一基 因盒与其耐药表型无对应关系。 关键词 ：禽；大肠埃希茵；多重耐药；整合子一基 因盒 中图分类号 ：Q812．65 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2014)10—0066—05 整合子 (integron)是 由StokesH W 等 ¨】]1989 1．1．2 培养基与试剂 LB培养基和 MH培养基， 年首次提出的一个与细菌耐药基 因水平快速散播有 北京陆桥生物技术有限公司产 品；质粒小提试剂盒 ， 关的可移动元件 ，可通过结合性质粒、转座子和整合 天根生化科技有 限公司产 品；GoTaqGreenMaster 型噬菌体等在同种和不 同种菌属间传播 ，它能在 自 Mix酶、DNA MarkerDL1000、DL 2000、DL 身整合酶的作用下识别、捕获、整合或剪切外源性耐 5000、HinfI(10U／uL)和琼脂糖 ，宝生物工程 (大 药基因，并在 自身启动子的参与下表达耐药基因，从 连)有限公司产品。 而使细菌获得耐药表型_2]。整合子结构主要包括 3 1．1．3 96孔药敏板 含有青霉素类 (氨苄西林 ／ 部分 ，5端 的整合酶基 因(integrase，IntI)、启动子 AM、奥格门丁 ／AC)、头孢类 (头孢噻呋／CEF)；氨基 和一个基因重组位点AttI，3保守端和中间的耐药 糖苷类 (庆大霉素／GM、大观霉素／sPT)、四环素类 (四环素／TE、多西环素／DOx)、氯霉素类 (氟苯尼 基因盒可变区。根据整合酶基因的不 同，将 目前发 考／FFC)、磺胺类 (磺胺异恶唑／SF、新诺 明／SXT)、 现的整合子分为6型，其 中1型～3型整合子与细菌 喹诺酮类 (恩诺沙星 ／ENR、氧氟沙星 ／OFL)、黏杆菌 的耐药性有关。大肠埃希菌中经常检出的是 I型和 素 (CLE)等 13种药物 ，天津市金章科技发展有限公 Ⅱ型整合子 。本研究通过检测胶东地区健康禽源大 司产品。 肠埃希菌耐药性及 I型和 Ⅱ型整合子的流行分布情 1．2 方法 况，并对其携带基因盒进行分析 ，进一步探讨整合子