王镜岩-生物化学-第14章__核酸的物理化学性质.ppt

第14章 核酸的物理化学性质;第一节 核酸的水解 ;核酸的水解;一、酸水解 ;二、碱水解 ;;三、酶水解 ;(3) 按磷酸二酯键断裂的方式 在3’-OH与磷酸基之间断裂 在5’-OH与磷酸基之间断裂 ; 2．核糖核酸酶类 ; 3．脱氧核糖核酸酶类 ;(3) 限制性内切酶 ;在上世纪中期，以Arber等人对入噬菌体在大肠杆菌不同菌株上的平板培养效应的研究为基础，发现了原核生物体内存在着寄生控制的限制和修饰系统。;核酸内切限制酶的类型 ;切割位点 ;Ⅱ型核酸限制性内切酶的基本特性;a. 识别位点：; ;核酸内切限制酶的命名法;第二节 核酸的酸碱性质 ;1．碱基的解离;例如：胞嘧啶的解离;例如：腺嘌呤的解离;2. 核苷酸的解离 ;第三节 核酸的紫外吸收 ; 嘌呤碱与嘧啶碱具有共轭双键，使碱基、核苷、核苷酸和核酸在240—290nm的紫外波段有一强烈的吸收峰，最大吸收值在260nm附近。不同核苷酸有不同的吸收特性。所以可以用紫外分光光度计加以定量及定性测定。 ;1. 核酸样品纯度和含量的鉴定 ;对于不纯的核酸可以用琼脂糖凝胶电泳分离出区带后，经溴化乙锭染色在紫外灯下粗略地估计其含量。 ;有时核酸溶液的紫外吸收以摩尔磷吸光系数来表示： ε(P)=A/c l ;第四节  核酸的变性、复性及杂交 ;一、核酸的变性(denaturation) ;1. 引起核酸变性的因素 ;2. 核酸变性的特点;3. 影响Tm值的因素 ;(3) 介质中的离子强度 。一般说在较高的离子强度时，DNA的Tm值较高，而且熔解过程发生在一个较小的温度范围之内。;二、复性 (renaturation) ;2. Cot l/2 ;三、核酸的杂交 (hybridization) ;2. 常见杂交的类型;（1）. Southern印迹杂交;;;（2）Northern blotting;（3）Western blotting