.动物细胞工程课件.pptVIP

2.2 动物细胞工程 动物细胞培养过程 1、细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上， 称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 2、细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 1、大规模的生产生物制品。 2、培养的动物细胞作为基因工程的受体细胞。 3、检测判断物质的毒性。 4、培养正常或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究，如用于 等，为 及其他疾病提供理论依据。 多莉羊的培育过程 * * 2.2 动物细胞工程 生产单克隆抗体 常用技术手段 动物细胞工程 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 动物细胞工程常用的技术手段技术： 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 一、动物细胞培养 1 、动物细胞培养的概念 动物细胞培养技术 动物细胞培养技术 1、选材： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。 2.将组织细胞分散成单个细胞 将组织块剪碎，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间，这样组织就会分三成单个细胞。 思考：为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ ①单个细胞容易和周围环境进行物质交换——获得营养物质、氧气等，排出代谢废物； ②分散成单个细胞培养能使细胞水平操作的其他技术得以实现 。 1.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？ P44旁栏 用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。 不能用胃蛋白代替 因为两者的最适pH不同，动物细胞培养适宜的pH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（最适pH 2.0）没有活性，而胰蛋白酶(最适pH 7.2-8.4)的活性较高。 胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ P44寻根问底 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。 动物组织 单个细胞 细胞悬液 贴壁生长 分瓶培养 10代细胞 50代细胞 不死细胞 原代培养 传代培养 胰蛋白酶 剪碎 加培养液 接触抑制 少数癌变 少数 3. 配制细胞悬液，进行原代培养及传代培养 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 4.如何界定原代培养和传代培养？ 随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖 ⑴原代培养: 将动物组织消化后的初次培养。 ⑵传代培养: 对贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后再分瓶继续培养。 动物组织块 细胞悬液 原代培养 传代培养 胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞 幼龄动物的器官组织；动物胚胎 动物细胞培养过程 细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养 加入培养液 用胰蛋白酶等处理贴壁细胞 适宜条件 不死性细胞 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考以下问题： 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？ 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ P46讨 论 充足营养（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等合成成分及血清、血浆等天然成分。） 适宜温度、PH和气体环境；无菌无毒环境 无菌无毒环境、充足营养（血清或血浆）、适宜温度、PH、气体环境。 4、体外培养动物细胞需要物质和环境条件 ⑴无菌、无毒的环境 ①对培养液、培养用具进行无菌处理； ②在培养液中加抗生素； ③定期更换培养液。 ⑵充的营足养 葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、 微量元素、血浆或血清 为什么要加血清呢？ ⑶温度和PH 36.5±0.5℃ ；PH = 7.2―7.4 ⑷气体环境——O2和CO2 C02的主要作用是维持培养液的PH。 含 95% 空气加 5% CO2 混合气体 5.动物细胞培养应用： 筛选抗癌药物 治疗和预防癌症 植物组织培养和动物细胞培养的比较 细胞 植物体 培养结果 获得细胞 或细胞分泌蛋白 快速繁殖、 培育无病毒植株 培养目的 葡萄糖 动物血清 蔗糖 植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 细胞的全能性 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 二.动物细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新