疟原虫纯化新方法的研究.pdfVIP

海南医学院学报 2014，20(5) 592 JournalofHainanMedicalUniversity DOI：10．13210／j．cnki．jhmu003 网络 出版地址 ：http：／／www．cnki．net／kcms／doi／10．13210／j．cnki．jhmu003．html 、 疟原虫纯化新方法的研究 黄宪希，易国辉，周利民，薛伟玲，郭 虹 (海南医学院科学实验 中心，海南 海 口 571199) [摘要] 目的：拟应用去 白细胞输血器 ，建立一种快速简便纯化疟原虫的新方法，以去除宿主 白细胞 DNA 干扰 。方法：建立PbANKA株 鼠疟模型；39只小鼠分为A组 (新鲜 虫血组，n一18)、B组 (冻存 虫 血组，一8O℃保存 ，n一16)及 C组 (正常对照组，n：5)；应用去 白细胞输血器对血样进行过滤纯化 ，观察 比较过滤速度及血样处理 (新鲜 、冻存)对去除 白细胞效果的影响；血细胞计数板和血涂片吉姆萨染色法 计数各样本过滤前后 白细胞、红细胞、原虫率并观察疟原虫形态和疟原虫密度 。滤过后 的血液提取 DNA，PCR验证 白细胞滤过效果。结果：经血细胞计数板计数 ，3组 白细胞平均去除率比较 ，差异无统 计学意义(P0．05)；C组红细胞的回收率高于A组，差异具有统计学意义 (P0．05)；B组则仅见原 虫。白细胞过滤后疟原 虫形态及密度无明显改变。PCR鉴定 PbGAPDH 结果 A、B组均为 阳性 ，而小 鼠GAPDH均为阴性 。结论 ：建立 了白细胞输血器一步法纯化疟原虫的新方法。该方法简便 、快速 、廉 价，是进行疟原虫分子生物学、免疫学等方面的研究不可或缺的实用技术。 [关键词]去白细胞输血器；伯氏疟原虫；纯化 [中图分类号]R331 [文献标识码]A [文章编号]1007—1237(2014)05—0592—04 A new methodforPlasmodium purification HUANG Xian—xi，YIGuo—hui，ZHOU Li—min，XUE W ei—ling，GU ()Hong (ScientifivExperimentCenterofHainanMedicalUniversity，Haikou571199，China) EFounaionProject]：supportedbyNationalNaturalienceFoundationofChina (N 106O14』))，ScientificResearch Foundatino ofHainan]~xticalUniversity ( 2OU0l1) [Author]：HUANGXian—xi(1956一)，Female，LiuyangHunan，DeputyDirectoroftheExaminer， Ph．D．，Te￡：l3111982522，E-maiZ：xianxi8888@ ahoo．com． [C0rrP50”PcPto]：GUOHong，P^．D．，Professor，TelE-mail：guo．061224@ 163．com． Received：20l4一O1—2O Revised：2014—01—25 JHMC，2014；20(5)：592—595 View from specialist：Itiscreative，andofcertain scientificandeducationalvalue． [ABSTRACT]Objective：Theprimalproblem forexistingmethodsofplasmodium purificationand concentrationiscomplicatedorexpensive．Inordertoovercomethedefects，itisnecessary todevelop a simpleandeffectivemethodtosuppressinterferenceofhostDNA inthemalariaparasitesresearch．Meth— ods：Plasmodium berghei(Pb)