丹参mir408基因前体序列的克隆及表达分析-植物科学学报.pdfVIP

植物科学学报　 ２０１６ꎬ３４(３):４３０~４３８ Ｐｌａｎｔ ＳｃｉｅｎｃｅＪｏｕｒｎａｌ ｈｔｔｐ:// ｗｗｗ.ｐｌａｎｔｓｃｉｅｎｃｅ.ｃｎ ＤＯＩ:１０１１９１３/ ＰＳＪ２０９５￣０８３７２０１６３０４３０ － 郭晓荣ꎬ杨新兵ꎬ王怀琴ꎬ明方琳ꎬ佘旭ꎬ曹晓燕.丹参ｍｉＲ４０８基因前体序列的克隆及表达分析[Ｊ].植物科学学报ꎬ２０１６ꎬ３４(３):４３０ ４３８ Ｇｕｏ ＸＲꎬＹａｎｇＸＢꎬＷａｎｇ ＨＱꎬＭｉｎｇ ＦＬꎬＳｈｅ ＸꎬＣａｏ ＸＹ. Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｉＲ４０８ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｒｏｍ Ｓａｌｖｉａ － ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ[Ｊ]. Ｐｌａｎｔ ＳｃｉｅｎｃｅＪｏｕｒｎａｌꎬ２０１６ꎬ３４(３):４３０ ４３８ 丹参ｍｉＲ４０８基因前体序列的克隆及表达分析 郭晓荣ꎬ 杨新兵ꎬ 王怀琴ꎬ 明方琳ꎬ 佘 旭ꎬ 曹晓燕 (药用资源与天然药物化学教育部重点实验室ꎬ 西北濒危药材资源开发国家工程实验室ꎬ 陕西师范大学ꎬ 西安 ７１００６２) 摘　 要:ＭｉＲ４０８是植物中一类高度保守的ｍｉＲＮＡꎬ 其靶基因编码含铜蛋白ꎬ ｍｉＲ４０８ 的表达受植物生长发育和 环境条件的显著影响ꎮ 拟南芥中ｍｉＲ４０８在ＨＹ５￣ＳＰＬ７基因网络中起着关键作用ꎬ 而ＨＹ５￣ＳＰＬ７基因网络可介导 拟南芥对光照和铜离子的协调应答ꎬ 进一步表明ｍｉＲ４０８在植物对环境的响应中发挥了核心作用ꎮ 本研究基于丹 参基因组Ｓｕｒｖｅｙ数据库ꎬ从中搜索并克隆得到３６６ ｂｐ的含有稳定茎环结构的ｍｉＲ４０８前体序列及其上游７２３ ｂｐ 片段的启动子区ꎬ ＧｅｎＢａｎｋ 登录号分别为 ＫＵ３６０３８４ 和 ＫＵ３６０３８５ꎬ 并将 ｍｉＲ４０８ 的前体序列命名为 Ｓｍ￣ ＭＩＲ４０８ꎮ 生物信息学分析结果显示: Ｓｍ￣ＭＩＲ４０８上游启动子序列与模式植物拟南芥 Ａｔｈ￣ＭＩＲ４０８、 水稻 Ｏｓａ￣ ＭＩＲ４０８启动子区具有许多相同的顺式作用元件ꎬ 如Ｇ￣ｂｏｘ、 ＣＧＴＣＡ￣ｍｏｔｉｆ、 ＴＧＡＣＧ￣ｍｏｔｉｆ、 ＧＴＡＣ￣ｍｏｔｉｆ等ꎬ 而 ＨＳＥ、 ＣＡＴＴ￣ｍｏｔｉｆ作用元件仅存在于丹参启动子区ꎻ ｍｉＲ４０８成熟序列在不同物种中具有很高的保守性ꎻ 基于 不同物种 ｍｉＲ４０８前体序列构建的系统进化树显示ꎬ 来源于单子叶植物的ｍｉＲ４０８前体序列聚为一支ꎬ 来源于 双子叶植物的ｍｉＲ４０８前体序列聚为另一支ꎮ 实时定量 ＰＣＲ分析结果显示: Ｓｍ￣ＭＩＲ４０８在丹参的根、 茎、 叶、 花中都有表达ꎬ 其在花中的表达量最高ꎬ 根中最低ꎻ Ｓｍ￣ＭＩＲ４０８ 的表达受茉莉酸甲酯和伤害的抑制ꎬ 黑 暗和持续光照也可抑制该基因的表达ꎮ Ｓｍ￣ＭＩＲ４０８基因的克隆与表达分析为今后研究丹参 ｍｉＲ４０８ 的功能奠 定了基础ꎮ 关键词:丹参ꎻ ｍｉＲ４０８ꎻ 前体序列ꎻ 表达分析 中图分类号:Ｑ７８　 　 　 　 　 文献标识码:Ａ　 　 　 　 　 文章编号:２０９５￣０８３７(２０１６)０３￣０４３０￣０９ Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｉＲ４０８ Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｒｏｍ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ ＧＵＯＸｉａｏ￣ＲｏｎｇꎬＹＡＮＧＸｉｎ￣ＢｉｎｇꎬＷＡＮＧ Ｈｕａｉ￣Ｑｉｎꎬ ＭＩＮＧ Ｆａｎｇ￣ＬｉｎꎬＳＨＥＸｕꎬＣＡＯＸｉａｏ￣Ｙａｎ∗ (Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ Ｎａｔｕｒａｌ