人亲环素b基因的克隆表达及重组蛋白的生物活性中国生物化学与.pdfVIP

第 15 卷第 1 期 中国生物化学与分子生物学报 V o l. 15,N o. 1 1999 年 2 月 Ch inese Jou rnal of B iochem istry and M o lecu lar B io logy Feb. 1999 人亲环素 B 基因的克隆表达及重组蛋白的生物活性 赵　权　李芳秋 　陈英剑　虞　伟　武建国 (南京军区南京总医院分子生物学实验室, 南京 210002) 摘要　应用 方法从人淋巴细胞中扩增出亲环素 ( , ) 基因, 克隆入 R T PCR B cycloph ilin B CyPB 28 载体中表达. 表达产物以包涵体形式存在, 占细菌可溶性蛋白的15%. 经 树脂金 pET a N i N TA 属螯合亲和层析和 50 柱层析纯化, 检测呈单一条带, 毛细管电泳为单一 Sephadex G SD S PA GE 色谱峰, 纯度达 95%. 经复性处理, 表达产物显示肽基脯氨基顺反异构酶活性. 关键词　亲环素 , 基因克隆, 基因表达, 肽基脯氨基顺反异构酶 B Clon ing, Expression of the Human Cycloph ilin B Gene in E scherich ia coli and Pur if ica tion and Character iza tion of Recom binan t Prote in , , , , ZHAO Q uan L I Fangqiu CH EN Y ingjian YU W ei W U J ianguo ( , , 210002) M olecu lar B iology L aboratory N anj ing General H osp ital of N anj ing Comm and N anj ing Abstract　T he cDNA encoding hum an cycloph ilin B (CyPB ) from hum an lym phocytes w as am p li fied by reverse tran scrip tion po lym erase chain reaction and after sequencing it w as cloned in to the 28 . 15% exp ression vecto r pET a T he fu sion p ro tein w as exp ressed in inclu sion body at of so lub le . bacteria