人源性天然抗体库的构建及淀粉样蛋白aβ42寡聚体单-微生物学报.pdfVIP

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2017-11-03 发布于天津
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人源性天然抗体库的构建及淀粉样蛋白aβ42寡聚体单-微生物学报.pdf

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生物工程学报 Chin J Biotech 2009, August 25; 25(8): 1195-1203 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2009 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 医学与免疫生物技术 Aβ1-42 1,2 1 2 1 1 1 1 1 包福祥 , 何金生 , 曹贵方 , 尹凡 , 王鑫 , 庞思媛 , 张莹 , 洪涛 1 , 100044 2 , 010018 : 本研究旨在利用噬菌体展示技术构建人源性天然抗体库, 以可溶性 Aβ1-42 寡聚体对抗体库进行筛选获得针对低分子量Aβ1-42 寡聚体的特异性单链抗体。利用RT-PCR 法从 10 个健康人外周血淋巴细胞中得到全套人抗体VH 和VL 基因, 经过重叠延伸PCR 将VH 和VL 连接得到scFv 片段, 将scFv 片段酶切后克隆至pCANTAB5E 噬菌体载体, 电转化 TG1 感受态菌, 获得库容为2.5×109 单链抗体库。经辅助噬菌体M13K07 拯救, 以可溶性Aβ1-42 寡聚体为抗原, 对抗体库进行4 轮筛选, ELISA 法筛选特异性识别Aβ1-42 寡聚体的阳性克隆, 将筛选到的阳性克隆B19 转化至E. coli HB2151 菌, 诱导表达可溶性 scFv 抗体。SDS及Western blotting 分析结果显示可溶性scFv 抗体获得了正确表达, 且能够与 Aβ −6 三聚体及纤维特异性结合, 亲和力(K )为 9 ×10 mol/L 。Aβ 寡聚体特异性单链抗体的获得为老年性痴呆 1-42 d 1-42 (AD)的治疗研究奠定了基础。 : 人源性天然抗体库, Aβ1-42 寡聚体, 单链抗体, 老年性痴呆 Isolation and identification of a human single chain Fv antibody against amyloid-beta 1-42 soluble oligomers from a human phage display library 1,2 1 2 1 1 1 1 Fuxiang Bao , Jinsheng He , Guifang Cao , Fan Yin , Xin Wang , Siyuan Pang , Ying Zhang , and Tao Hong1 1 College of Life Sciences Bioengineering, Beijing Ji