调控剂的电子传递性质对骨骼肌型钙释放通道的调控效应研究.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2013, 40(8): 766~774 控剂的电子传递性质对骨骼肌型 钙释放通道的 控效应研究* 宋维涛 朱倩蓉 叶雁萍 夏若虹** (华东师范大学物理系，上海200241) 摘要 肌质网(sarcoplasmic reticulum ，SR) 中的钙释放通道利阿诺定受体(ryanodine receptor ，RyR)是调控胞浆钙离子浓度的重 要蛋白，其活性受多种调控剂影响 调控剂的不同电子传递性质可能作用于RyR 的功能性巯基，进而影响其门控状态 了 解具有不同电子传递性质的调控剂影响钙通道的作用机制具有重要意义 本研究采用光子相关光谱法(PCS)、CPM(7- 二乙 基-3-(4 - 马来酰亚胺苯基)4- 甲基香豆 )荧光标记法及[3 H]-ryanodine 结合等实验，分别检测多种调控剂对RyR1 的蛋白及复 合体粒度分布、自由巯基量及对通道状态的影响，利用光漂白法检测各调控剂的电子传递性质 结果显示，激活剂和巯基氧 化剂具有类似电子受体的性质并产生相似作用，即自由蛋白粒度增加，自由巯基量减少，具有激活通道作用；抑制剂和巯基 还原剂则具有类似电子供体的性质，作用效果相反 关键词 钙释放通道，巯基，调控剂，电子传递性质 学科分类号 Q64 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2012.00593 研究发现，许多重要的离子通道，如钙释放通 RyR 的功能可受多种氧化还原调控剂影响，例 道、钾离子通道和钠离子通道等，都以巯基作为通 如巯基氧化剂[醌类、硒化合物、氧化型谷胱甘肽 道功能的活性中心[1-3] 巯基易被氧化形成由两个 (GSSG)和Zn2+ 等]、巯基还原剂[二 苏糖醇(DTT) 半胱氨酸经过共价连接(二硫键)而成的胱氨酸残 和谷胱甘肽(GSH)]等 此外，非氧化还原调控剂如 基，后者在体内参与抗氧化和巯基/ 二 键交换等 甲基化黄嘌呤衍生物(methylxanthines)包括咖啡因、 多种重要的生理反应，巯基的氧化还原状态决定了 腺嘌呤核苷等都能促进RyR 的开放，而丁卡因、 2+ [10] 通道的激活与抑制，并调控通道的开放和关闭 钌 、普鲁卡因、Mg 等对RyR 则有抑制作用 . 利阿诺定受体(ryanodine receptor，RyR)/ 钙释 非氧化还原试剂虽然不能完全得到或失去电子，但 放通道属于动物细胞内膜系统(肌质网和内质网) 的 由于具有不同的电子传递性质，能够在一定程度上 [4] 钙释放通道家族 ，在多种细胞功能中，尤其在兴 吸引或排斥电子并导致其电子云发生不同方向的位 奋收缩耦联过程，扮演了重要角色 目前哺乳动物 移，因此有可能通过各自的电子传递特性来影响 中已检测到3 种不同的通道亚型，分别为骨骼型 RyR1 (RyR 1)、心脏型(RyR2) 和脑型(RyR3) [5-6] 其中 此项研究拟用多种氧化还原调控剂(如ZnCl 、 2 RyR1 作为最大的通道复合体之一，富含大量的自 亚硒酸钠、GSSG、DTT 和GSH 等)和非氧化还原 由巯基，对氧化还原环境非常敏感 RyR1 上关键 调控剂(如普鲁卡因、咖啡因家族化合物等)对提取 部位巯基的氧化，可以增强单层膜