禽多杀性巴氏杆菌c48-3株外膜蛋白h的致病作用.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１４，３４（６）：３１３９ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 禽多杀性巴氏杆菌Ｃ４８３株外膜 蛋白Ｈ的致病作用 １ １ １ ２ １ 韦　东 　吾鲁木汗·那孜尔别克 　段世雄 　严　芳 　恩特马克·布拉提白 （１吉首大学生物资源与环境科学学院　吉首　４１６０００　２吉首市畜牧水产局动物疫病预防控制中心　吉首　４１６０００） 摘要　目的：探讨禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白Ｈ（ＯｍｐＨ）的致病作用。方法：用大肠杆菌表达系 统表达强毒株 Ｃ４８３的重组蛋白ＯｍｐＨ，亲和层析法纯化 Ｎ端带有 ６个组氨酸标签的重组 ＯｍｐＨ，通过皮下注射兔制备抗 ＯｍｐＨ抗血清，用生物学功能实验比较野生株 Ｃ４８３、突变株 ΔｏｍｐＨ和互补株Ｃ４８３Ｃ的粘附能力、血清抵抗性和抗吞噬作用。结果：与野生株和互补株相比， 突变株对ＣＥＦ细胞的粘附能力显著降低，而抗ＯｍｐＨ抗体显著抑制野生株和互补株对ＣＥＦ细胞 的粘附，但该抗血清不影响突变株的粘附能力。野生株和互补株在鸡血清中的存活率显著高于 突变株，但灭活鸡血清处理不影响它们的存活率。小鼠腹腔巨噬细胞对突变株的吞噬能力显著 高于野生株和互补株，而抗ＯｍｐＨ抗体增强巨噬细胞对野生株和互补株的吞噬能力，但该抗体不 影响巨噬细胞对突变株的吞噬能力。结论：ＯｍｐＨ是禽巴氏杆菌的致病因子，它在该菌对宿主的 感染与致病过程中发挥重要的作用。 关键词　禽多杀性巴氏杆菌　ＯｍｐＨ　粘附　血清抵抗性　抗吞噬作用 中图分类号　Ｑ８１９ 　　多杀性巴氏杆菌（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ）以下简称 结果显示３９ｋＤａ蛋白的单克隆抗体只能与强毒株 Ｐ 巴氏杆菌，是一种有荚膜的革兰氏阴性短杆菌，能够感 １０５９细胞壁表面的荚膜层结合，所以，他们认为３９ｋＤａ 染家畜、家禽和野禽等多种动物。临床研究表明，禽霍 蛋白是荚膜蛋 白（３９ｋＤａｃａｐｓｕｌａｒｐｒｏｔｅｉｎ，Ｃｐ３９）。 ［７］ 乱是主要由血清型Ａ∶１、Ａ∶３或Ａ∶４巴氏杆菌引起的一 Ｂｏｒｒａｔｈｙｂａｙ等 用抗体从Ｐ１０５９株基因组文库中克隆 ［１］ 出Ｃｐ３９蛋白的编码基因，用大肠杆菌表达系统对ｃｐ３９ 种接触性传染病，对养禽业造成严重的经济损失 。 目前，用灭活疫苗和活菌疫苗来预防禽霍乱，但灭活疫 基因进行表达并制备其抗血清，结果显示抗重组蛋白 苗只对同源菌株的感染具有保护作用，而活菌疫苗对 ｒＣｐ３９抗体抑制了同源菌株 Ｐ１０５９和异源菌株 Ｘ７３ 同源菌株和异源菌株的感染具有一定的交叉保护作 对ＣＥＦ细胞的粘附，而ＤＮＡ测序结果表明ｃｐ３９基因和 用，但易出现毒力返强的现象［２３］。所以，研究禽巴氏 ｏｍｐＨ基因核苷酸序列的同源性为 ９９％。Ｓｔｈｉｔｍａｔｅｅ ［８］ 杆菌的外膜蛋白的免疫功能和致病作用，为禽霍乱的 等 的研究表明ｒＣｐ３９免疫组鸡对 Ｐ１０５９株和Ｘ７３ 预防可提供十分重要的线索。 株致死性攻毒的保护率分别为１００％和８０％，与Ｘ７３ ［４５］ ［９］ 　　Ｂｏｒｒａｔｈｙｂａｙ等 的研究表明，血清型Ａ禽巴氏杆 株ＯｍｐＨ的保护率相等。后来恩特马克等 对血清型 菌荚膜厚度与３９ｋＤａ蛋白含量直接相关，而抗３９ｋＤａ Ａ∶１禽巴氏杆菌Ｃ４８３的ｃｐ３９基因进行了克隆和表达， 蛋白抗体抑制了细