洛伐他汀检测方案.docVIP

HPLC检测茶叶中的洛伐他汀 1.洛伐他汀的结构 2.性质 性状：白色结晶粉末；熔点：174.5℃；分子式：C24H36O5(M=404)； 溶解性：易溶于氯仿、乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙醇、苯、碱性水溶液，不溶于正己烷、中性及酸性水溶液。 3.洛伐他汀标准溶液的配置 准确称取洛伐他汀对照品 19.6mg，甲醇溶解后超声助溶，置于 100mL 容量瓶中，再用甲醇稀释定容，摇匀后得洛伐他汀标准液A。密封置于冰箱中贮存，备用。 4.洛伐他汀标准曲线的绘制 分别量取配置的洛伐他汀标准溶液A 0.5mL，1.0mL，2.0mL，3.0mL，4.0mL 置 10mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，照高效液相色谱法实验，分别吸取以上稀释溶液各 20μL，经 0.45μm 微孔滤膜过滤后，注入液相色谱仪，记录相应的峰面积响应值，以洛伐他汀浓度为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制洛伐他汀标准曲线。 5.洛伐他汀样品溶液的制备 准确称取普洱茶茶叶样品 1.0g，加入 20mL 乙酸乙酯超声波浸提 10 分钟后过滤，滤液中加入活性炭除色素，过滤后浓缩，浓缩液用 10mL 甲醇溶解，制成样品溶液进行测定。 6.洛伐他汀的检测方法 普洱茶中的洛伐他汀采用高效液相色谱法进行检测。采用 C18色谱柱，流动相为甲醇:水=80:20，柱温为 30℃，紫外检测器波长为 237nm，将制备的样品溶液以进样量为 20μL 进行分析。 7.洛伐他汀样液提取优化 7.1溶剂浸提 准确称取普洱茶叶样品 20g 于具塞锥形瓶中，加入 200mL 乙酸乙酯室温浸提 24h，抽滤，滤液蒸干，残渣加 50mL 甲醇溶解，甲醇溶液真空抽滤后加石油醚洗涤色素，至石油醚接近无色，甲醇溶液旋转浓缩至 10mL 甲醇溶液进行测定。方法流程如图 2-5。 7.2超声波提取法 准确称取普洱茶茶叶样品 1.0g，加入 20mL 乙酸乙酯超声波浸提 10 分钟后过滤，滤液中加入活性炭除色素，过滤后浓缩，浓缩液用 10mL 甲醇溶解，制成样品溶液进行测定。方法流程如下图 2-6。 ①普洱茶中洛伐他汀超声波提取剂的选择 准确称取普洱茶茶叶样品七份各 1.0g，分别加入乙酸乙酯，丙酮，苯，乙酸丁酯，无水乙醇，氯仿各 20mL，使用超声波清洗仪超声波浸提 10 分钟后过滤，滤液中加入活性炭除色素，过滤后浓缩，浓缩液用 10mL 甲醇溶解，制成样品溶液进行分析。 ②超声波物料比的选择 准确称取普洱茶茶叶样品四份 1.0g，分别按 1:10，1:15，1:20，1:25，的物料比加入乙酸乙酯，使用超声波清洗仪超声波浸提 20 分钟后过滤，滤液中加入活性炭除色素，过滤后浓缩，浓缩液用 10mL 甲醇溶解，制成样品溶液进行分析。 ③超声波温度的选择 准确称取普洱茶茶叶样品四份各1.0g，分别加入20mL乙酸乙酯，在不同的温度下15℃，20℃，25℃，30℃使用超声波清洗仪超声波浸提10分钟后过滤，滤液中加入活性炭除色素，过滤后浓缩，浓缩液用10mL甲醇溶解，制成样品溶液进行分析。 ④超声波提取时间的选择 准确称取普洱茶茶叶样品六份各1.0g，分别加入20mL乙酸乙酯，使用超声波清洗仪超声波分别浸提5，10，15，20，25，30分钟后过滤，滤液中加入活性炭除色素，过滤后浓缩，浓缩液用10mL甲醇溶解，制成样品溶液进行分析。 7.3洛伐他汀HPLC检测条件的确定 ⑴ 流动相比例的选择 改变流动相流动相比例，甲醇：水=70:30，75:35，80:20，85:15，90:10，保持流速和柱温不变，流速为1mL/min，柱温为30℃，选择不同流动相比例测定洛伐他汀的保留时间。 ⑵ 流速的选择 改变流速，0.5，0.8，1.0mL/min，流动相比例和柱温保持不变，流动相比例为甲醇∶水=80：20，柱温为30℃通过改变流速来测定洛伐他汀的保留时间。 ⑶柱温的选择 通过设置不同的柱温箱温度25℃，28℃，30℃，流动相比例和流速保持不变，流动相比例为为甲醇∶水=80:2 0，流速为1mL/min来测定洛伐他汀的保留时间。 7.4洛伐他汀稳定性研究 ⑴洛伐他汀在甲醇溶液中的稳定性研究 分别准确量取配置的洛伐他汀标准溶液A置 10mL 量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得样品溶液。一份保存在冰箱中，另一份室温放置。取洛伐他汀样品溶液参照 6所述方法检测，每隔一段时间取样一次，每次进样 20μL，测得峰面积，并计算其 RSD。 ⑵洛伐他汀在乙酸乙酯溶液中的稳定性研究 准确称取洛伐他汀标准品 20mg，用乙酸乙酯定容至 100mL 容量瓶中，然后量取洛伐他汀乙酸乙酯溶液 2mL 置 10mL 量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得样品溶液。一份保存在冰箱中，另一份室温放置。所取洛伐他汀样品溶液