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问题讨论 烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？ 动物细胞工程常用的技术手段： 动物细胞培养技术、 动物细胞核移植技术、 动物细胞融合技术、 生产单克隆抗体技术 思考题 4.相关概念 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。 动物细胞培养条件： 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养（与体内相同，合成培养基） （葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等） （还需血清、血浆等） 3、温度和pH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体） 作为基因工程中的受体细胞 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性 为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据 * 取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植 动物细胞培养技术 回忆： 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养技术、 植物体细胞杂交技术 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 1.动物细胞培养 如何进行细胞培养? 2.2.1动物细胞培养和核移植技术 从动物机体中取出相关的组织，将它们分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 1.1概念 1.2 动物细胞培养过程 1、选材： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官：它们的细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。 2、分散成单个细胞： 成块的组织中细胞与细胞靠在一起，彼此限制了细胞的生长和繁殖。 方法：先将选好的组织块剪碎，然后用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间，这样组织就会分散成单个细胞。 如何分散成单个细胞？ 2.为何、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？ 1.动物细胞培养选材要注意什么？ 4.什么是原代培养和传代培养？ 3.细胞生长增殖中有什么特性？ 6.细胞培养的结果和目的是什么？ 5.人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？ 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维、胶原蛋白等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 课本思考题：进行细胞培养是用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶处理行吗？ 胰蛋白酶活性在pH 7.2~8.4之间最高，而胃蛋白酶的最适pH在2左右；传代培养的比较合适的pH在7.2~7.4之间。 3、动物细胞培养过程 胚胎或幼龄动物的组织器官 细胞悬液 原代培养 传代培养 剪碎 胰蛋白酶 加入培养液 贴壁生长 接触抑制 胰蛋白酶、分瓶 要求：培养瓶或培养皿的内表面光 滑、无毒、易于贴附。 细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 原代培养: 传代培养: 贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖，称为传代培养。 胚胎或幼龄动物的组织器官 细胞悬液 50代细胞 剪碎 胰蛋白酶 原代培养 动物细胞培养不能最终培养成生物体 细胞增殖缓慢，核型可能变化 10代以内，保持正常二倍体核型 传代培养 无限增殖（癌变，获不死性） 转入培养液 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 思考：如何界定原代培养和传代培养？ 多数组织细胞固定在瓶壁上生长和分裂。 随细胞增多，细胞就 会停止分裂增殖 遗传物质改变 传至10代后不 易传下去 动物组织 单个细胞 细胞悬液 贴壁生长 分瓶培养 10代细胞 50代细胞 不死细胞 原代培养 传代培养 胰蛋白酶 剪碎 加培养液 接触抑制 少数癌变 少数 动物细胞培养技术流程 动物组织 单个细胞 细胞悬液 贴壁生长 分瓶培养 10代细胞 50代细胞 不死细胞 原代培养 传代培养 胰蛋白酶 剪碎 加培养液 接触抑制 少数癌变 少数 动物细胞培养技术流程 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考以下问题： 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？ 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ 讨 论 充足营养 适宜温度、PH和气体环境；无菌无毒环境 与植物培养基相比其特点是： 液体培养基 含有动物血清 动物体细胞大都生活在液体的环境 1.4 动