2010年激光共聚焦TCSSP2经典服务案例.PDF

2010 年激光共聚焦 TCS SP2 经典服务案例 案例二 服务对象：江苏大学 （1）试验材料 ICR 小鼠舌组织冰冻切片 （2 ）样品处理方法 取 6~8 周大 ICR 小鼠，氮气致死，即刻将舌组织取出置于组织 支承器，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上，将冷冻好的组织块，夹 紧于切片机持承器上，修平组织，调好欲切的厚度，制作冰冻切片， 取一载玻片，将切片附贴上即可。最后将制好的玻片进行免疫荧光染 色。 （3 ）共聚焦操作步骤 启动激光共聚焦显微镜、软件和激光器，将样品玻片置于载物台， 在 VIS 模式中观察样品，转入 LSM 配置，扫描图像，获取免疫荧 光图片，观察舌面食物触觉感受神经末梢形态与分布，并应用自身附 带软件处理图像。 （4 ）共聚焦参数条件 激发波长：488nm 发射波长：525nm 扫描密度（分辨率）：512*512 物镜放大倍数：40* 目镜放大倍数：10* （5 ）检测结果 通过共聚焦显微镜观察免疫荧光染色后的舌组织冰冻切片，发现 丝状乳头的舌前端的神经小体具有 Merkel 触盘的形态特征，如整体 形态呈半螺旋状，部分神经纤维具有分叶状形态，整体大小长约为 80-90μm ，宽 20μm 左右。舌后端处于轮廓状乳头附近的体觉凸起部 分，其下发现了类似小体结构的神经终端，形态大小与舌前端存在差 异，宽 10μm ，长约 20μm 左右。差异说明舌面丝状乳头的不同区域 或许有着不一样的功能作用，在食物感受中发挥着不同功效。 报告名称 江苏大学舌面食物触觉感受神经末梢形态与分布研究报告 委托单位 江苏大学 委托人 帅正蓉 服务单位 浙江工商大学食品与生物工程学院 仪器操作应用人 秦玉梅 检测目的 研究舌面食物触觉感受神经末梢形态与分布 检测样品 ICR 小鼠舌组织冰冻切片 检测结果： 根据委托方检测目的，以免疫荧光染色的 ICR 小鼠舌组织冰冻切片为检测对象， 分析 ICR 小鼠舌面食物触觉感受神经末梢形态与分布。通过初步实验确定采用激光 共聚焦来进行 CY3 荧光检测。 结果如下： 丝状乳头的舌前端如图 1 （A ）免疫荧光染色结果表明，神经小体即具有Merkel 触盘的形态特征，如整体形态呈半螺旋状，部分神经纤维具有分叶状形态，整体大 小长约为 80-90μm ，宽20μm 左右。舌后端(B)处于轮廓状乳头附近的体觉凸起部分， 其下发现了类似小体结构的神经终端，形态大小与舌前端（A ）存在差异，宽 10μm ， 长约 20μm 左右。（C ）为NF 的空白对照。结果如下图。 图 1 丝状乳头下特殊神经终端 NF 免疫荧光图 （A ）舌前部丝状乳头下特殊神经终端，（标尺为75μm ）（B ）舌后部丝状乳头下特殊神经终端， （标尺为34.46μm ）, (C)为空白对照，（标尺为 174μm ）