SigBQ225P突变促进金黄色葡萄球菌生物被膜-第三军医大学学报.PDF

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SigBQ225P突变促进金黄色葡萄球菌生物被膜-第三军医大学学报

 http://aammt.tmmu.edu.cn         第三军医大学学报,2017,39(8) 711 DOI:10.16016/j.10005404.201610077 SigB(Q225P)突变促进金黄色葡萄球菌生物被膜形成 1 1 1 2 1 2 1 刘 慧 ,尚伟龙 ,彭华刚 ,周 坤 ,胡 珍 ,周人杰 ,饶贤才   (400038重庆,第三军医大学基础医学部 1 2 微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室 ;430037重庆,第三军医大学新桥医院急救部 )   [摘要] 目的 探讨金黄色葡萄球菌SigB(Q225P)突变对其生物被膜形成能力的影响。方法 比较 临床分离金葡菌(XQ株)与实验室传代获得菌落颜色变白之XQW株的生物学特性,通过结晶紫染色法 以及激光共聚焦检测菌株的生物被膜形成。进行XQ及XQW全基因组测序,比较相关基因,寻找突变 位点。分别扩增sigB(Q225P)基因及其上游片段,经酶切后连接穿梭载体pBT2,构建同源重组质粒 pBT2sigB(Q225P),电转化至金葡菌 RN4220,再将经 RN4220修饰后的质粒电转入 Newman。利用 pBT2质粒对温度敏感的特点筛选 NewmansigB(Q225P)。利用同样的方法构建 sigB敲除菌株 NewmansigB,并构建回补菌株Newman sigB/sigB以及NewmansigB/sigB(Q225P)。比较这些菌 △ △ △ 株的生物被膜形成差异。结果 XQW株在液体培养基中呈絮状生长,结晶紫法以及激光共聚焦检测结 果显示其生物被膜形成能力显著强于野生株,全基因组测序和比较发现 XQW 的sigB基因发生 (Q225P)突变。构建的同源重组质粒pBT2sigB(Q225P)及pBT2sigB转化金葡菌Newman后,经筛 △ 选,获得NewmansigB(Q225P)及NewmansigB菌株;回补质粒pLI50sigB及pLI50sigB(Q225P)转 △ 化NewmansigB,筛选获得回补菌株NewmansigB/sigB及NewmansigB/sigB(Q225P)。经过结晶 △ △ △ 紫染色法及激光共聚焦测定生物被膜,发现NewmansigB(Q225P)较野生株的生物被膜形成能力显著升 高,与XQW的生物被膜形成能力强于XQ野生型的表型相一致;NewmansigB/sigB(Q225P)的生物被 △ 膜形成能力明显高于NewmansigB/sigB。结论 SigB(Q225P)具有促进金葡菌生物被膜形成的能力。 △   [关键词] 金黄色葡萄球菌;生物被膜;同源重组;sigB   [中图法分类号] R372;R378.11;R394.3  [文献标志码] A SigB(Q225P)mutationpromotesformationofStaphylococcusaureusbiofilm 1 1 1 2 1 2 1 1 LiuHui,ShangWeilong,PengHuagang,ZhouKun,HuZhen,ZhouRenjie,RaoXiancai(Departmentof Microbiology,ChongqingLaboratoryofMicrobiologic

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