一株产植酸酶青霉的分类鉴定及其植酸酶基因克隆和在-安徽农业大学.pdfVIP

安徽农业大学学报, 2012, 39(5): 788-792 Journal of Anhui Agricultural University 网络出版时间：2012-7-4 17:53:31 [URL] /kcms/detail/34.1162.S1753.036.html 一株产植酸酶青霉的分类鉴定及其植酸酶基因克隆 和在毕赤酵母中的表达 1 1,2* 2 1 1* 包佳源 ，马忠友 ，戚明玲 ，黄 勃 ，樊美珍 (1. 安徽农业大学安徽省微生物防治重点实验室，合肥 230036 ；2. 安徽科技学院生命科学学院，蚌埠 233100) 摘 要：植酸酶是催化植酸盐水解成磷酸盐的一类酶的总称，添加到猪和家禽动物的饲料中可以提高植酸磷的利 用率和促进对矿质元素的吸收利用。根据形态特征和 ITS 分子序列，作者对该实验室筛选得到的高产植酸酶菌株青霉 RCEF4908 进行了鉴定，确定该菌株在系统分类上属于草酸青霉Penicillium oxalicum Currie Thom。利用特异性引物 扩增出植酸酶成熟肽基因片段，蛋白质序列含有保守区域 RHGXRXP 和 HD ，属于组氨酸酸性磷酸酶家族。通过基因 操作成功实现了植酸酶在 Pichia pastoris GS115 的表达。转化子 P49 在诱导培养 144 h 后酶活性可以达到约 8 000 -1 U·mL 。重组植酸酶在pH 2.5~7.0 之间都有活性，在 pH 5.5 时酶活性最高；在90 ℃水浴处理 10、20 和 30 min 后酶 活性仍分别保留 53.8%、52.5%和 45.2% ，具有较高的耐热性，适宜于作为饲料添加剂，有进一步开发的价值。 关键词：ITS 序列；草酸青霉；耐热植酸酶；诱导表达 中图分类号：Q78; Q936 文献标识码：A 文章编号：1672−352X (2012)05−0788−05 Identification of a Penicillium isolate, gene cloning of phytase and its expression in Pichia pastoris 1 1,2 2 1 1 BAO Jia-yuan , MA Zhong-you , Qi Ming-ling , HUANG Bo , FAN Mei-zhen (1. Anhui Provincial Key Laboratory of Microbial Pest Control, Anhui Agricultural University, Hefei 230036; 2. School of Life Sciences, Anhui Science and Technology University, Bengbu 233100) Abstract: Phytases are a group of enzymes capable of releasing phosphate from phytate, and have been ap- plied mainly to animal (swine and poultry) diets in order to improve phytate P digestibility and mineral bioavail- ability. RCEF4908, a strain with high ph