鸡贫血病毒VP2基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达.pdfVIP

鸡白血病、传染性贫血 25．0％；7日龄时，对照组禽白血病病毒阳性率为性率为18．3％，干扰素组为16．8％；46日龄时，对 12．4％，干扰素组病毒阳性率为17．4％；15日龄时，照组病毒阳性率为24．2％，干扰素组为22．1％。 对照组病毒阳性率为64．1％，干扰素组为49．7％l 以上实验数据表明(参考图表1)：15日龄左右 23日龄时，对照组病毒阳性率为54．2％，干扰素组为禽白血病病毒的排毒高峰期。在病毒排毒高峰期 阶段，干扰素与白细胞介素一2的应用明显降低了 为52．3％，．31日龄时，对照组病毒阳性率为36． 6％，干扰素组为39．6％；39日龄时，对照组病毒阳群体阳性率，可能对病毒的复制有一定的影响。 鸡贫血病毒VP2基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达。 黄冬艳1，杨兵2#，陈小玲2，徐福洲2，齐欣3 (1江西农业大学动物科学技术学院南昌330045；2北京市农林科学院北京100089； 3沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳110161；羹为通讯作者) [摘要]本研究根据鸡贫血病毒cux一1株基因组序列设计了一对引物，通过PCR扩增出VP2基因。将扩增出的片 因亚克隆到PET一32a(+)载体上并进行原核表达。SDS和WesternBlot分析表明，一个分子质量为44．4kDa的重 组蛋白获得了成功表达，并且鸡贫血病毒阳性血清能和重组蛋白发生反应。 [关键词] 鸡贫血病毒；VP2基因}克隆，表达 anemia Cux一 鸡贫血病毒(chickenvirus，CAV)是鸡究设计了一对引物，成功克隆并表达出CAV infectious 传染性贫血(chicken anemia，CIA)的病1株的VP2，为深入以VP2为对象的研究打下了基 原。自1979年Yuasa等[1】在日本首次分离到鸡贫血础。 病毒(Gifu一1株)以来，英国‘引、瑞典‘31、美国‘4’5，6。、 1材料与方法 巴西[川、阿根廷‘引、澳大利亚‘引、新西兰‘103和南非‘11] 等国均已发现该病毒的存在。我国于1992年首次在 1．1材料CAVCux一1株由北京市畜牧兽医研究 所提供；克隆载体pGM—T Vector(TA连接 黑龙江省分离到CAV[121，随后在河南、山东、江苏、 Easy 辽宁、吉林等地的鸡群中也陆续分离到CAVE|33。 CAV感染可引起雏鸡骨髓造血组织和胸腺等淋巴 胶DNA回收试剂盒、预混合蛋白质Marker购自北 组织萎缩，从而导致严重贫血，使病鸡生长受阻，甚 京天为时代科技有限公司；表达载体pET一32a 至造成死亡[1“。因此在世界范围内，CAV已成为危(+)由北京市畜牧兽医研究所李永清博士惠赠；感 害养禽业的重要病原体之一。 Marker DNA聚合酶、dNTPs、DNADL2000、T4 CAV含有3个开放阅读框架，分别编码3种蛋 DNA I、EcoR Ligase、Sal I均为Takara公司产 白质(VPl、VP2和VP3)。VPl是CAV唯一的结构 品。 蛋白，VP2为辅助蛋白，与病毒的装配有关，而VP3 1．2方法 是CAV的致病性蛋白。其中VP2是CAV的保护 1．2．1