体细胞核移植细胞分化程度低.PPT

动物细胞培养和核移植技术 3、动物细胞培养过程中几个重要的概念 1. 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上（单层）。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 2. 接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 3.原代培养 (primary culture) 定义：把第1代细胞的培养与传10代以内的细胞培养统称为原代培养。 定义：当原代培养的细胞生长停止，这时如果要使细胞继续生长，就要及时用胰蛋白酶等，使细胞从瓶壁上解离下来，然后加入新的培养液，将细胞分离稀释，并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内，这个过程称传代培养 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、微量元素等） 3、温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）  动物细胞特点？ 分化潜能变窄：随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄，这是指整体细胞而言。 细胞核仍具有全能性：细胞核，它含有保持物种遗传性所需的全套基因，而且并没有因细胞分化而丢失基因，因此高度分化细胞的细胞核仍具有全能性 根据动物细胞核仍具有全能性的特点,怎样将动物细胞的全能性表达? 1. 概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。 五、体细胞核移植技术存在的问题 胚胎移植－动物幼体产出 概率＜10％ 克隆动物存在着健康问题 克隆动物的食品安全性问题存在争议 知识点小结 1.动物细胞培养要经过脱分化吗？为什么？ 2.体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 5.什么叫单层细胞培养 1957年，科学家采用胰蛋白酶消化处理和应用液体培养基的方法，获得了单层细胞培养。单层培养法的出现，对细胞培养的发展起了很大的推动作用。 6.去核的方法有哪些？ 目前核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作去核法。还有人采用其他方法，如梯度离心、紫外光短时间照射、化学物质处理等。这些方法是在没有刺破透明带或卵母细胞质膜的情况下，去除细胞核或使卵细胞核DNA变性，从而达到去核目的。 四、体细胞核移植技术的应用前景 1、加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 2、保护濒危物种，增加存活数量 3、克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 4、可以作为异种移植的供体，可以用于组织器官的移植 动物体细胞核移植技术和克隆动物 1. 克隆动物的概念 2.体细胞核移植技术的过程 3.体细胞核移植技术的应用前景 4.体细胞核移植技术存在的问题 课后习题 3. 胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。 4.为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？ 血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质为白蛋白和球蛋白；氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，有些动物细胞不能合成，必须由培养液提供；激素有胰岛素、生长激素等促进细胞的生长、增殖、贴附。因此，细胞培养要保证细胞能顺利生长和繁殖，一般要添加10%----20%的血清。 * * * * 植物组织培养 植物体细胞杂交 1.动物细胞培养 2.动物细胞融合 3.单克隆抗体 4.胚胎移植 5.核移植 回顾： 动物细胞工程常用的技术手段： 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 就是从动物机体中取出相关组织，将它分散成单细胞，然后,放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。 1、动物细胞培养的应用和概念： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 胰蛋白酶 剪碎 单个细胞 加培养液 制成 细胞悬浮液 10代 细胞 部分细胞“癌变”，无限传代 动物细胞培养不能 最终培养成动物体 50代细胞 原代培养 传代培养 细胞贴壁 剥离、分瓶 细胞株 细胞 细胞系 2.动物细胞培养过程： 增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养 去掉组织间 蛋白 动物细胞培养特点： 贴壁生长、接触抑制： 过程：从动物机体中取出组织 ? 剪碎 ? 加胰蛋白酶? 细胞游离 ? 加培养液 ? 将细胞接种到培养瓶内 ? 培养（1--2天换一次培养液）? 细胞贴壁生长 ? 长成单层细胞 4.传代培养 (subculture) 细胞株： 从原代培养细胞群中筛选出进行传代培