关岭牛myodⅰ基因启动子报告质粒的构建及活性验证verificationof.pdfVIP

基因组学与应用生物学，2013 年，第32 卷，第4 期，第459-466 页 Genomics and Applied Biology, 2013, Vol.32, No.4, 459-466 研究报告 Research Report 关岭牛MyoD Ⅰ基因启动子报告质粒的构建及活性验证 1,2 2* 2 2 1,2 2 李飞 许厚强 陈伟 陈祥 刘敏 桓聪聪 1 贵州大学生命科学学院, 贵阳, 550025; 2 高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室, 贵州大学动物科学学院, 贵阳, 550025 * 通讯作者, houqiang0524@ 摘 要 为了克隆关岭牛MyoD Ⅰ基因启动子并验证其启动活性，根据GenBank 中牛的MyoD Ⅰ基因序列设计 PCR 引物，用PCR 技术扩增牛 基因的启动子，构建重组克隆载体pUCmT- ；并通过PCR 扩增、 MyoD Ⅰ MyoD Ⅰ 限制性酶切、测序及生物信息学分析对阳性克隆进行鉴定；构建报告质粒pGL3- ，并将其转染小鼠 MyoD Ⅰ C2C12、3T3-L1 细胞系，检测其24 h 后的双荧光素酶活性。实验结果获得了关岭牛MyoD Ⅰ基因启动子，其序列 长度为993 bp，并成功构建了 启动子报告质粒；双荧光素酶活性检测表明pGL3- 在小鼠C2C12 MyoD Ⅰ MyoD Ⅰ 细胞中的表达是pGL3 空载体40.65 倍，在小鼠3T3-L1 细胞中的表达是空载体的1.13 倍， 启动子在小 MyoD Ⅰ 鼠C2C12 细胞中的表达高于3T3-L1 细胞(**p 0.01)。结果表明关岭牛MyoD Ⅰ基因启动子具有启动活性，在小 鼠骨骼肌细胞中特异性表达。 关键词 基因, 启动子, 荧光素酶, C2C12, 3T3-L1 MyoD Ⅰ Verification of Activity and Construction of the Report Plasmid of MyoD Ⅰ Gene Promoter in Guanling Cattle Li Fei 1,2 Xu Houqiang 2* Chen Wei 2 Chen Xiang 2 Liu Min 1, 2 Huan Congcong 2 1 College of Life Science, Guizhou University, Guiyang, 550025; 2 Key Laboratory of Animal Genetics, Breeding and Reproduction in the Plateau Mountainous Region, Ministry of Education, College of Animal Science, Guizhou University, Guiyang, 550025 * Corresponding author, houqiang0524@ DOI: 10.3969/gab.032.000459 Abstract To verify the promoter activity of the MyoD Ⅰgene by cloning promoter from the Guanling cattle, ac- cording to the gene sequence of cat