基于形态分子方法对疑似灵芝属样品的基原探究-中国现代中药.pdfVIP

２０１７年７月　第１９卷　第７期 中国现代中药　ＭｏｄＣｈｉｎＭｅｄ Ｊｕｌ２０１７　Ｖｏｌ１９　Ｎｏ７ ·基础研究 · 基于 “形态 ＋分子”方法对疑似灵芝属 样品的基原探究△ １，２ ３ １ ２ ２ ２ ２ 董晓曼 ，王亚君 ，查良平 ，蒋超 ，金艳 ，赵玉洋 ，袁媛 （１安徽中医药大学 药学院，安徽　合肥　２３００１２； ２道地药材国家重点实验室培育基地 中国中医科学院 中药资源中心，北京　１００７００； ３国家纳米科学中心，北京　１００１９０） ［摘要］　目的：为疑似 “灵芝”属样品基原探究提供性状和分子鉴定证据。方法：在基于传统形态特征初步鉴 定基础上，对疑似灵芝属两样品ＺＺ和ＳＳ的ｒＤＮＡＩＴＳ区序列进行ＰＣＲ扩增，经克隆测序后，与ＧｅｎＢａｎｋ数据库中 序列进行ＢｌａｓｔＮ比对，样品及最相似物种ＩＴＳ序列对齐后使用ＭＥＧＡ６０软件构建系统发育树。结果：测序得到样 品ＺＺ和ＳＳ的ｒＤＮＡＩＴＳ区序列分别为７５２、７５３个碱基，与已发表极硬红皮孔菌（Ｐｙｒｒｈｏｄｅｒｍａａｄａｍａｎｔｉｎｕｍ）ｒＤＮＡ ＩＴＳ区序列相似度达９９０％，并在系统发育树中与极硬红皮孔菌聚为一支，而与紫芝、树舌灵芝遗传距离较远。结 合样品ＺＺ和ＳＳ的子实体形态和扫描电镜观察鉴定结果判断其为极硬红皮孔菌。结论：基于ｒＤＮＡＩＴＳ区序列分析 和系统发育树构建药用真菌分子鉴定方法，为疑似样品基原鉴定提供理论依据和技术支持。 ［关键词］　分子鉴定；极硬红皮孔菌；ＩＴＳ序列 ＡＰｒｉｍａｒｙＳｔｕｄｙｏｎＣｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＴｗｏＳａｍｐｌｅｓＢａｓｅｄｏｎＭｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＡｎａｌｙｓｅｓ １，２ ３ １ ２ ２ ２ ２ ＤＯＮＧＸｉａｏｍａｎ ，ＷＡＮＧＹａｊｕｎ，ＺＨＡＬｉａｎｇｐｉｎｇ，ＪＩＡＮＧＣｈａｏ，ＪＩＮＹａｎ，ＺＨＡＯＹｕｙａｎｇ，ＹＵＡＮＹｕａｎ （１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＡｎｈｕｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈｅｆｅｉ２３００１２，Ｃｈｉｎａ； ２ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＤａｏｄｉＨｅｒｂｓＢｒｅｅｄｉｎｇＢａｓｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＲｅｓｏｕｒｃｅＣｅｎｔｅｒｆｏｒＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ， ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ； ３ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＮａｎｏｓｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１９０，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙａｎｄｃｌａｓｓｉｆｙｔｗｏｓａｍｐｌｅｓｗｈｉｃｈｗｅｒｅｓｕｓｐｅｃｔｅｄａｓＧａｎｏｄｅｒｍａ，ｔｈｅｍｏｒ ｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒａｎａｌｙｓｅｓｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄＭｅｔｈｏｄｓ：Ｂａｓｉｎｇｏｎｐｒｉｍａｒｙｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｍ，ｔｈｅｒＤ ＮＡＩＴＳｒｅｇｉｏｎｗｅｒｅａｍｐｌｉｆｉｅｄｔｈｅｒｅｂｙ，ｔｈｅｒＤＮＡＩＴＳａｍｐｌｉｃｏｎｗａｓｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄｂｙｃｌｏｎｉｎｇ，ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，ｂｌａｓｔ