野油菜黄单胞菌中烯脂酰acp还原酶的功能鉴定-生物化学与生物.pdf

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2016, 43(5): 514~522 野油菜黄单胞菌中烯脂酰ACP 还原酶的功能鉴定* 1, 2) 1) 2)** 余永红 马建荣 王海洪 1) 2) ( 广东食品药品职业学院，广州510520； 华南农业大学生命科学学院/ 东省农业生物蛋白质功能与调控重点实验室，广州510642) 摘要 烯脂酰ACP 还原酶是细菌脂肪酸合成的关键酶之一 本研究通过生物信息学分析发现，野油菜黄单胞菌X anthomonas campe stris (X cc ) 8004 基因组中XC_01 19 (X ccf abV ) 注释为反-2- 烯脂酰CoA 还原酶基因 但其编码产物与铜绿假单胞菌的烯 脂酰ACP 还原酶FabV 具有较高的同源性，并含有相同的催化活性中心Tyr-(Xaa) -Lys 序列 用携带X ccf abV 的质粒载体互 8 补大肠杆菌f abI 温度敏感突变株JP1111 ，转化子能在42 ℃生长，表明X ccf abV 能遗传互补大肠杆菌f abI 突变 体外重建脂 肪酸合成反应表明，XccFabV 能催化不同链长的烯脂酰ACP 还原为脂酰ACP，且催化活性不受三氯森抑制 遗传学研究表 明，X ccf abV 是必需基因，不能获得X ccf abV 基因敲除突变株 将携带大肠杆菌f abI 的外源质粒导入野生菌后，可敲除染色 体上的f abV 基因，获得的替换突变株生长特性和脂肪酸组成未发生显著变 ，但替换突变株对三氯森敏感 上述结果证实， 野油菜黄单胞菌f abV 是必需基因，编码烯脂酰ACP 还原酶，参与脂肪酸从头合成反应，且FabV是X cc 对三氯森耐受的根 本原因 关键词 野油菜黄单胞菌，脂肪酸合成，烯脂酰ACP 还原酶，三氯森耐受性 学科分类号 Q93 DOI: 10.16476/j .pibb.2015.0343 细菌采用 脂肪酸合成系统从头合成脂肪 研究表明，DSF 合成的前体来源于脂肪酸合成途 [1] [12-13] [14] 酸，每步反应都由独立的酶催 烯脂酰ACP 还 ，但关于X cc 脂肪酸合成的报道不多 ，合 原酶(ENR)催 脂肪酸合成循环的最后一步反应， 成途 还不清楚 研究X cc 的脂肪酸合成代谢，阐 是脂肪酸合成的关键酶，已作为抗菌药物筛选靶 明DSF 信号合成途 ，对防控黑腐病具有重要的 标，用于新型抗菌药物的筛选[2-3] 目前已报道的 意义 为此，本课题组采用异体遗传互补、体外酶 烯脂酰ACP 还原酶有四种类 ：玉 (FabI)[4] 、 学分析和基因突变等手段，研究了 8004 中烯脂 X cc (FabK) [5] 、芋 (FabL)[6] 和郁 (FabV) [7] 不同类 酰ACP 还原酶(ENR)在脂肪酸合成代谢等方面的 的酶学特征存在差异，表现出较为复杂的多样性. 功能 黄单胞菌属是植物病原菌中较大的类群，能侵 1 材料与方法 染近400 种单子叶或双子叶植物 该属主要的致病 菌包括野