旋转反应器胶原支架的制备及复合软骨细胞修复骨-中国医药生物技术.PDF

中国医药生物技术 2012 年 8 月第 7 卷第 4 期 Chin Med Biotechnol, August 2012, Vol. 7, No. 4 257 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.04.002 ·论著· 旋转反应器胶原支架的制备 及复合软骨细胞修复骨软骨损伤的 初步研究 孙晶，綦惠，陶剑锋，杰永生，陈磊，程晓光，孙磊 【摘要】 胞增殖、分化和移行，与创伤愈合过程关系密切。 目的 以胶原为原料开发一种小型胶原支架材料，尝试是 胶原的水溶液经冷冻干燥后可制得胶原膜，可广泛 否适合旋转反应器来复合软骨细胞，并探讨复合细胞后修复 用于皮肤创伤和烧伤的修复、牙周引导膜、皮肤缺 软骨损伤的效果。 陷、骨缺损的修复、神经及血管的修复、药物缓释 方法 成年猪跟腱中提取胶原，制备胶原支架，进行细胞毒 系统、基因传递载体、整形美容、止血、伤口敷料 性检测和生物相容性分析。将其切成 1 mm3 小块，置于旋 等[7-10] 。多孔胶原膜是组织工程常用的支架材料。 转培养器中与软骨细胞共培养，倒置相差显微镜观察细胞贴 由于软骨再生修复能力有限，本研究应用多孔胶原 附效果。建立兔关节软骨缺损模型，编号后，将 14 只新西 膜作为软骨修复的支架材料，采用旋转培养的体 兰大白兔随机分为 2 组：支架材料组（n = 8 ），兔膝关节软 系，有利于细胞在培养过程中的物质交换，促进软 骨缺损区植入胶原支架材料和软骨细胞；空白对照组（n = 骨细胞贴附以及后期软骨的修复。 6 ），不进行任何植入处理。进行 HE 染色后观察。 结果 胶原支架呈瓷白色，表面空隙均匀，无细胞毒性，生 1 材料与方法 物相容性良好，但在体内降解较快。在旋转反应器中，支架 1.1 材料 可以与软骨细胞良好结合。胶原支架植入动物体内 12 周， 1.1.1 主要试剂 DMEM/F-12 培养基购自美国 虽未完全修复缺损，但已有少量软骨细胞在缺损处出现，修 Hyclone 公司；四甲基偶氮唑盐（MTT ）购自韩国 复效果优于对照组。 Biosharp 公司；胃蛋白酶、II 型胶原酶、胰蛋白酶 是美国 Sigma 公司产品；乙酸、戊二醛等为国产 结论 制备的胶原支架复合软骨细胞短期内有一定的修复 分析纯试剂；透析袋和培养板分别来自生工生物工 软骨缺损的能力，长期效果欠佳，可能与胶原支架在体内过 程（上海）股份有限公司和美国 Corning 公司。 快降解有关，尚需对制备方法进行改进。 1.1.2 仪器 细胞培养箱是美国 Thermal 公司的 【关键词】 胶原； 支架（骨科）； 生物相容性材料； 产品；倒置相差显微镜购自日本 Olympus 公司； 细胞培养技术 低温高速离心机购自美国 Sigma 公司；真空冷冻 中国医药生物技术, 2012, 7(4):257-262 干燥机是美国 Virtis 公司产品；酶标仪购自美国 Bio-Rad 公司。 鉴于软骨细胞和软骨组织的特殊性，关节软骨 1.1.3 实验动物 SPF 级成年