动物体细胞融合与单克隆抗体.pptVIP

思考题 1.植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？ 灭活病毒诱导细胞融合的原理： 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。 动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞。 骨髓瘤细胞 教学反馈 1.动物细胞融合技术最重要的用途是 （ ） A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新物种 D.生产杂种细胞 1. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞， 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 （ ） ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞　 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A.②④ B.①③⑤　　 C.①②③④ 　 D.②③ 3.“生物导弹”是指 （　 ） A.单克隆抗体 　　　　　　　　 B.杂交瘤细胞 C.产生特定抗体的B淋巴细胞　　 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物 三.思考与探究 1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？ 2.制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？ 1.已成功的动物细胞融合实例还有哪些？ 2.为什么不用两个而要用多个细胞进行动物细胞间的融合？ 就目前常用的细胞融合方法来看，不管是用物理的、化学的方法，还是生物的方法，其融合率都不可能是100%。仅用两个细胞融合，其效率太低，不一定能得到融合细胞。更重要的是，即使两个细胞已发生融合，但并不一定是研究者期望得到的细胞类型。目前动物细胞融合技术最有价值的应用就是单克隆抗体的制备。我们以制备单克隆抗体为例来说明这一问题。我们知道，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，如果仅取一个脾细胞（含B淋巴细胞）和一个瘤细胞杂交，我们不能确定该脾细胞分泌的抗体是否正是我们所需要的；若用大量的脾细胞和瘤细胞进行融合，就可以从融合细胞中筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。 3.如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？ 融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。 * 不同DNA的两个细胞 有丝分裂 两个完整的杂交细胞 灭活的病毒 动物细胞融合过程示意图 2.动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？ 3.植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？ 4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗？其他方法？ 5.植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？ 6.你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？ · 动物细胞融合主要为获得杂交瘤细胞。 · 杂交瘤细胞的培养主要是生产单克隆抗体。 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 主要用途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振动、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 细胞融合的原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较 1.抗体是由何种细胞产生的？ 2.一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？ 3.抗原侵入机体之后，引起机体免疫反应产生的抗体只有一种？ 4.简述获得抗体的传统途径？ 5.这种方法获得的抗体有什么缺陷？ 6.如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？ 7.体外培养淋巴细胞能无限增殖吗?怎样解决这个问题？ 单克隆抗体的相关问题 免疫小鼠 培养骨髓瘤细胞 融合 B淋巴细胞 注射特定抗原蛋白 选择培养基上培