动物细胞融合与单克隆抗体-定稿.pptVIP

一、动物细胞融合 1、动物融合的过程 请同学们阅读课本P52动物融合 思考题 1、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？ 2、动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞形成一个细胞的过程 7、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？ 思考题 ★制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？ * * 不同DNA的两个细胞 灭活病毒诱导细胞融合 融合后的细胞进行有丝分裂 1、动物细胞融合过程 酶解法，如纤维素酶或果胶酶 2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？ 无需，因为动物细胞无细胞壁 3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？ 离心、电激等物理方法；PEG等化学方法 4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？ 能 还可以利用灭活的病毒进行诱导 5、植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？ 不能 6、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？ ？ 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振动、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物、动物细胞融合的比较 思考题 利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞 8、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？ 生产单克隆抗体 提问 ？ 1.抗体是由何种细胞产生的？ ２、一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？ ３、一种抗原侵入机体之后，引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗？ ４. 简述获得抗体的传统途径？ ５、这种方法获得的抗体有什么缺陷？ 二、单克隆抗体 抗原 动物体 刺激 浆细胞 抗体 抗体不纯 特异性差、纯度低； 产量低、反应不够灵敏 传统血清抗体的制备 抗原不纯 每个Ｂ淋巴细胞只能分泌一种抗体，由一个Ｂ淋巴细胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单一的。 如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？ 体外培养淋巴细胞能无限增殖吗? 体外培养单个Ｂ淋巴细胞，提取分泌的抗体 怎样解决这个问题？ 设计方案： 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖 杂种细胞 二、单克隆抗体 2.制备过程： 诱导其融合的方法有哪些？ 融合后培养液中有几种细胞 怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点 注射抗原的目的是什么 为何要进行克隆化培养和专一抗体检测，多次筛选 大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法 3.单克隆抗体的应用： ①在基础理论研究中具有重要意义 ②在疾病诊断、治疗和预防方面，具有 特异性高、灵敏度高等优越性。 ③生物导弹 二、单克隆抗体 ★假如你掌握了动物细胞融合技术，你想用它来解决什么问题？ B BB B瘤 瘤瘤 瘤 细胞融合后培养液中有几种细胞？ 筛选杂种细胞 已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加PEG促融，在筛选培养基上筛选获得杂种细胞。 幻灯片 15 *