蛋白质分子荧光探针研究及其应用新进展-分析化学.PDFVIP

第! 卷 分析化学 （()*+, -./+.) ）’ 评述与进展 第 期 #$$% 年 月’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ 0123454 67893:; 7 /3:;=2?:; 014@259= ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ A! A B A!C !!!!!!! ! ! 评述与进展 ! ! !!!!!!! 蛋白质分子荧光探针研究及其应用新进展 陈蓁蓁’ 张 宁’ 张文申’ 唐 波# （山东师范大学化学化工与材料科学学院，济南#D$$A ） 摘’ 要’ 人体中多达A$ 万种以上的蛋白质结构，功能千差万别，形成了生命的多样性和复杂性。在分子水平 上分析和识别蛋白质对生命科学研究具有重要的理论和实践意义。本文综述了各种蛋白质分子荧光探针在 蛋白质分析方面的应用，并展望了此类荧光探针的发展趋势和应用前景。引用文献%$ 篇。 综述 关键词’ 蛋白质，荧光探针， ! 引 言 对蛋白质进行定量分析和特异识别探讨生命机理是十分重要的。蛋白质溶液构象、蛋白质与小分 子或生物大分子相互作用等结构和功能的研究将直接阐明生命在生理或病理条件下的变化机制，对生 命奥秘的揭示、临床诊断以及药物筛选等领域的发展具有重要的意义。 蛋白质的分子光谱分析方法按仪器原理的不同，可以分为分光光度法、荧光分析法、化学发光法和 光散射分析法等，其中荧光分析法因其具有灵敏度高、选择性好 、动态响应范围宽以及测定条件更接近 生命体的生理环境的优点而在蛋白质分析中应用广泛。荧光探针技术是利用物质的光物理和光化学特 ［A］ 性，在分子量级上研究溶液中蛋白质高灵敏度的分析方法 。 蛋白质分子荧光探针按荧光波长可分为发射在紫外可见区的荧光探针和近红外荧光探针。紫外可 见区的荧光探针如香豆素、荧光素、罗丹明类分子等因具有较高的量子产率而常被用于制备荧光底 物［# B ］ ［D ，% ］ 。近年来以菁类、恶嗪类为代表的近红外荧光探针 发展迅速，其优点在于散射光弱、背景干扰 口 低，低激发能量减小了光漂白，使用近红外激光器提高了灵敏度，因而特别适合用于生物样品的测定。 按探针与蛋白质的结合方式可分为共价键结合式和非共价键嵌入式，共价键结合的标记物比由非共价 ;87945?43 ）和荧光生成试剂（;8792E 嵌入式所得复合物更稳定。按探针用途不同可分为荧光标记试剂（ I432? ）。为了降低检出限，提高检测灵敏度，常用强荧光的标记试剂或荧光生成试剂对蛋白质进行标记 或衍生，生成具有高荧光强度的物质。此外，荧光共振能量转移（(J)F ）探针也在蛋白质结构、功能研 究中得到广泛应用。本文主要就近年来以上常见蛋白质分子荧光探针的结构特性和与蛋白质的作用方 式及其在蛋白质分析方面的应用进展作简要综述，并展望了此类探针的发展趋势和应用前景。 # 紫外可见区的荧光探针 紫外区的分子荧光探针在蛋白质的结构和功能研究中应用较少。因短波长激发光能量较大，易对 被标记生物分子造成光损伤。当用紫外光激发时，许多细胞及组织产生背景光吸收和自身荧光 （:87;87945?43?4 ），会对探针荧光产生干扰。但是，对于包含免疫荧光、核酸及蛋白质芯片等多波长荧 光分析应用来讲，短波长蓝光能够提供对比色，使得能较容易从其它长波发射的荧光探针中分辨出来。 可见区的荧光探针具有较高的摩尔吸光系数和荧光量子产率，结合光漂白后荧光恢复（(J/K ）、荧光偏 振（(K ）、荧光相关光谱（(0L ）、荧光共振能量转移（(J)F ）等技术使得它们成为蛋白质构象、结构性能 以及蛋白质相互作用研究的极佳探针。 ’ #$$%E$#E#$ 收稿；#$$%E$ E# 接受 本文系国家自然科学基金项目（#$!!D$!$ ，#$DCD$!% ）、教育部新世纪优秀人才支持计划（*0)FE$ E$%DA ）及山东省自然科学基金重点