试验2高效液相色谱法测定可乐中的咖啡因含量.PDFVIP

实验2、高效液相色谱法测定可乐中的咖啡因含量 一、实验目的 1、学习高效液相色谱仪的基本操作； 2 、掌握标准曲线法（外标法）定量分析的方法； 3、掌握UV 检测器的工作原理及应用范围。 二、实验原理 根据朗伯－比尔定律（A=abc ）：在一定浓度范围内，样品中被测组分的含量与响应值 （峰面积或峰高）成正比。用标准物质配制一系列不同浓度的标准样品，在一定的色谱条件 下，分别测定标准样品和试样的峰面积，以标准溶液的浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，采 用最小二乘法回归得到被测样品标准曲线的方程；将测得试样的峰面积代入方程，计算得到 试样中咖啡因的含量。 三、仪器、试剂及色谱条件 仪器：Agilent 1200 HPLC ；C18 高效液相色谱柱，Φ 4.6mm×15cm，填料粒度5μm；紫 外光检测器（DAD ）；微量进样器（25μL ）；色谱条件：流动相：甲醇：水=65：35 （V/V ）， 1mL/min；检测波长：254nm ；色谱柱温度：30℃；进样量：10μL。 试剂：无水甲醇、咖啡因（均为分析纯试剂）、市售可乐、超纯水。 四、实验步骤 1、流动相的配制：甲醇、水分别须经0.45 微米有机膜、水相膜过滤后使用； 2 、流动相脱气：将流动相置于超声波清洗器上脱气 15min （本机配自动脱气装置，脱气过 程略）； 3、标准溶液的配制：配制咖啡因含量为20 、40 、80、160、320μg/mL 的甲醇溶液； 4 、按仪器操作说明打开计算机和主机，进入色谱工作站，设定色谱条件； 5、启动色谱系统，调整仪器基线，待基线稳定即可进样； 7、用进样器分别抽取10.0μL 系列标准液及样品，排出注射器中气泡，插入六通阀的进样孔 进样，仪器自动开始采集、保存数据； 8、实验结束后，用纯甲醇清洗色谱柱及进样器，关闭仪器。 五、数据处理及实验结果 以标准溶液的浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，采用最小二乘法回归得到标准曲线方程， 计算可乐中咖啡因的含量，实验结果见下表。 HPLC 测定可乐中咖啡因含量实验结果表 序号 样品名称 含量/μg/mL 峰面积 保留时间/min 备注 1 标准溶液 20.0 标准曲线方程： 2 标准溶液 40.0 3 标准溶液 80.0 R ＝ 4 标准溶液 160.0 5 标准溶液 320.0 6 可口可乐 7 百事可乐 六、思考题 1、标准曲线法定量准确度的影响因素有哪些？ 2 、为什么流动相必须要经过脱气、过滤处理？ 3、紫外检测器适合于分析那些种类的物质？ 实验10、GC-MS 定性分析混合溶剂的成分 一、实验目的 1、学习GC-MS 的基本操作； 2 、掌握GC-MS 的构成及工作原理； 3、了解谱库检索法定性分析有机化合物的方法。 二、实验原理 混合物样品在色谱柱中被分离为单一组分，依次进入质谱仪的离子源并被电离成具有不 同质核比（m/z ）的离子，质量分析器将具有不同m/z 的离子分离，被分离的离子按照m/z 由小到大的顺序依次到达接收器产生电信号并被记录，得到各组分相应的质谱图（棒图）， 根据质谱图可采用谱库检索法或谱图解析法分别对各组分进行定性分析。 三、仪器、试剂及仪器条件 仪器：GC-MS 2010 PLUS （日本岛津）；试剂：酯类混合物；仪器条件： 1、色谱仪条件：RTX 毛细管柱，Φ 0.25mm×30m，0.25μm ；Tc ：50℃保持1min ，以10℃/min 升温到120℃，保持1min；载气：氦气，分流比30~50:1，线速度35cm/s，流量1mL/min； Tj=200℃；进样量1μL。 2 、质谱仪条件：EI 电离源温度为200℃，70eV；接口温度为200 ℃；m/z 扫描范围30~300 。 四、实验步骤 1、打开氦气钢瓶并调整输出压力为0.4-0.5MPa，启动计算机、色谱仪及质谱仪，建立通讯 联系； 2 、启动真空系统，至真空度达到仪器规定值后进行仪器调整； 3、按照分析条件设定色谱仪、质谱仪