马氏珠母贝ikkε同源基因的克隆及表达分析molecular.pdfVIP

水生生物研究，2014年, 第3卷, 第1-7页 Shuisheng Shengwu Yanjiu, Vol.3, 1-7 研究报告 Research Report 马氏珠母贝IKKε 同源基因的克隆及表达分析 焦钰 杜晓东* 王庆恒 黄荣莲 邓岳文 广东海洋大学水产学院, 湛江, 524025 * 通讯作者, gdhddxd@ 摘 要 IKK (inhibitor of NF-B kinases )是NF-B (nucleur factor B)信号通路中的关键成员，参与调控 ε κ ε κ κ 细胞的分化、发育、凋亡及免疫反应。本研究根据马氏珠母贝转录组数据库中注释为IKKε 的unigene 序列设 计引物，应用cDNA 末端快速扩增(RACE)技术克隆获得了马氏珠母贝(Pinctada martensii) IKKε 基因cDNA 的全长序列(PmIKK )并对其序列特征进行分析；同时利用荧光定量PCR (Real-time PCR)技术检测了马氏珠 ε 母贝六个组织中 基因mRNA 的表达。结果表明： 基因cDNA 全长2 843 bp ，其中5 UTR 为 PmIKKε PmIKKε 116 bp，3 UTR 为516 bp，含有27 bp polyA ，开放阅读框为2 211 bp ，编码737 个氨基酸残基。预测其分子量 为85.07 kD，等电点为6.17。多序列比对显示PmIKKε 与其它物种IKKε 有较高的同源性，与牡蛎的序列相 似性有45% 。软件分析结果显示PmIKKε 的N 端含有一个蛋白激酶功能结构域和一个MAPKK (mito- gen-activated protein kinase kinase) 的激活位点，C 端含有一个亮氨酸拉链(leucin zipper, LZ)和一个螺旋-环- 螺旋结构(helix-loop-helix, HLH)。荧光定量PCR 分析表明PmIKKε 在马氏珠母贝肝胰脏、性腺、血淋巴、鳃、 外套膜、闭壳肌六个组织中均有表达，肝胰脏中表达量最高。本研究为进一步阐述PmIKKε 在马氏珠母贝生 长、发育及先天性免疫中的作用提供理论基础。 关键词 IKK , , 基因克隆, 荧光定量PCR ε Pinctada martensii Molecular Characterization and Expression Analysis of PmIKKε cDNA from Pinctada martensii Jiao Yu Du Xiaodong * Wang Qingheng Huang Ronglian Deng Yuewen Fisheries College, Guangdong Ocean University, Zhanjiang, 524025 * Corresponding author, gdhddxd@ DOI: 10.13417/j.gab.033.000266 IKK (inhibitor of NF-B kinases ) is an important component in the NF-B (nucleur factor B) sig- Abstract ε κ ε κ κ nal pathway and plays crucial roles in the differentiation, development, apoptosis and immune response. In this study, based on the unigene sequence annotated as IKKε in the transcriptome database of Pinctada martensii, using rapid amplification of c