应用itraq技术筛选高转移和低转移肺腺癌细胞中差异表达的-tumor.pdfVIP

150 　　肿瘤2013 年2 月第33 卷第2 期　TUM OR Vol. 33, February 2013 DOI: 10.3781/j .issn.1000-7431.2013.02 .008 Copyright© 2013 by TUM OR Basic Research 基础研究 · 应用iTRAQ技术筛选高转移和低转移肺腺癌细胞 中差异表达的膜蛋白 林河春，张方琳，耿　沁，赵方瑜，孙　磊，孔韩卫，李　静，姚　明 上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室，上海　200032 [ 摘要 ]　目的：筛选高转移和低转移肺腺癌细胞中差异表达的膜蛋白，以寻找肺癌的生物学标志物或治疗的潜在 靶点。方法：提取具有相同来源、不同转移潜能的肺腺癌 SPC-A-1 和 SPC-A-1 sci 细胞的膜蛋白，应用核素标记 相对和绝对定量 （isobaric tags for relative and absolute quantitation ，iT RAQ ）技术标记膜蛋白，联合纳升液相色 谱和串联质谱 （nano liquid chromatography-tandem mass spectrometry ，Nano-LC-MS/MS ）分离、分析肽段，采 用 Proteinpilot 4.0 软件对蛋白进行鉴定和定量分析，对获得的差异蛋白进行 GO （Gene Ontology ）分析，应用实 时荧光定量 -PCR 和蛋白质印迹法进行验证。结果：样品进行 4 次 Nano LC-MS/MS，鉴定出符合假阳性率＜ 1% 的分别有 1 413 、1 374 、1 297 和 1 351 个蛋白，标记率＞ 95% ，其中4 次都上调的蛋白有 27 个 （膜蛋白20 个）、 下调的蛋白有 32 个 （膜蛋白25 个）。GO 分析显示，差异蛋白的分子功能主要集中在细胞骨架蛋白结合、同源蛋 白结合和酶结合。生物学进程主要集中在代谢进程和细胞定位。SPC-A-1 sci 细胞中 ITGA3 （integrin alpha-3 ）、 MY H9 （myosin ，heavy chain 9 ）、PLEC1 （plectin 1 ）、HADHA （3-hydroxy acyl-CoA dehydrogenase ）、HK1 （hexokinase-1 ）、KTN1 （kinectin 1 ）、ESYT 1 （extended sy naptotagmin-like protein 1 ）、ALDH18A 1 （aldehyde dehydrogenase 18 family ，member A 1 ）、ATP5A 1 （ATP sy nthase alpha-subunit ）、LMNB2 （lamin-B2 ）、CAV1 （caveolin-1）和 CK-19 （keratin，type I cytoskeletal 19 ）mRNA 的表达水平以及 CLTC （clathrin，heavy chain ）、HK1、 LMNB2 和 CK-19 蛋白的表达水平均高于 SPC-A-1 细胞，与质谱定量结果一致。结论：iTRAQ 联合 Nano LC-MS/ MS 技术能高通量地筛选与转移相关的膜蛋白，为肺腺癌患者转移的诊断和预后提供可能的生物学标志物或治疗靶点。 [ 关键词 ]　肺肿瘤；膜蛋白质类；肿瘤转移；iT RAQ [中图分类号]　R734.2 [文献标志码] A [文章编号]　1000-7431 (2013) 02-0150-07 Screening for membrane proteins differentially expressed between the lung adenocarcinoma cell lines with high- and low-metastatic potential using i