华中农业大学博士论文答辩.ppt

1.2 gcNOD2: cDNA全长3130bp，编码982个氨基酸； ORF为2949bp，编码982氨基酸，5′-UTR为81bp， 3′-UTR为103bp， C端LRR有7个串联结构域；N端有两个CARD，结构域在27-81、111-200；中间NACHT结构域在271-441。 四、创新点及下步研究计划 1.主要创新点 （1） 首次从草鱼中克隆了胞内识别细菌的模式识别受体NOD1和NOD2基因的cDNA全长和基因组全长； （2） 对草鱼胞内模式识别受体NOD1和NOD2从mRNA水平、蛋白水平及细胞水平进行了表达或定位分析；同时，首次研究了病毒的感染对细菌模式识别受体NOD1和NOD2基因表达的影响； （3） 克隆了草鱼IFN-γ相关基因的cDNA全长和基因组全长，并对该基因的表达规律进行研究；首次提出了草鱼IFN-γ相关基因与NOD样模式识别受体在发挥功能上存在相关性。 2.下步研究计划 （1）研究NOD样模式识别受体对细菌成分的识别以及在病毒感染中的作用； （2）研究NOD样模式识别受体在激活下游的NF-κB的信号通路的作用； （3）研究IFN-γ与NOD样模式识别受体的协同作用。 三、gc IFN-γrel基因的克隆与表达分析 2. gcIFN-γrel基因与其他物种γ-干扰素与γ-干扰素相关基因同源性比较 Species Amino acid identity/similarity (%) Catfish IFN-γrel 37.8/63.2 Zebrafish IFN-γrel 62.9/77.6 Carp IFN-γrel 50.0/71.9 Zebrafish IFN-γ 19.8/44.3 Goldfish IFN-γ 21.7/44 Cod IFN-γ 20.6/44.3 Catfish IFN-γ 21.8/48.3 Carp IFN-γ 20.7/41.4 Fugu IFN-γ 17.7/40.7 Trout IFN-γ1 19.4/48.9 Trout IFN-γ2 21.5/50.6 Salmon IFN-γ 21.9/52.8 三、gc IFN-γrel基因的克隆与表达分析 3. gcIFN-γrel基因与其他硬骨鱼类γ-干扰素与γ-干扰素相关基因的系统发育关系 三、gc IFN-γrel基因的克隆与表达分析 4. gcIFN-γrel基因的组织表达 三、gc IFN-γrel基因的克隆与表达分析 5. gcIFN-γrel基因在脂多糖和PolyI:C刺激下的诱导性表达 * * * * LPS * * * * polyI:C 三、gc IFN-γrel基因的克隆与表达分析 6. PGN的刺激对草鱼IFN-γrel、NOD1和NOD2表达的影响 三、gc IFN-γrel基因的克隆与表达分析 7. gcIFN-γrel基因在呼肠孤病毒感染下的诱导型表达 * * * * * * * 三、gc IFN-γrel基因的克隆与表达分析 8.小结 (1)序列分析显示本研究所克隆的gcIFN-γrel基因是一个 与斑马鱼、鲶鱼和鲤鱼中IFN-γrel基因同源的基因，而不是那个早已存在的IFN-γ基因； (2)与哺乳类和鲑鳟的IFN-γ不同的是，从20条不同来源的草鱼的序列分析显示，gcIFN-γrel在它的内含子中缺乏多态性微卫星序列； 三、gc IFN-γrel基因的克隆与表达分析 (3) gcIFN-γrel呈广泛的组成性表达； (4)聚肌胞甘酸(polyI:C)，一种模拟病毒双链RNA而合成的dsRNA，能上调gcIFN-γrel基因的表达; (5)在所分析的四个组织中， gcIFN-γrel 的表达规律与gcNOD2相一致；推测IFN-γ和IFN-γrel被细菌的产物PGN所激活可能是通过NOD2依赖的方式。 四、创新点及下步研究计划 五、课程学习及论文发表情况 1.课程学习情况 学位课 11个学分 非学位课 3个学分 共计 14个学分 2.发表论文情况 Chen WQ (陈文钦), Xu QQ, Chang MX, Nie P, Peng KM. Molecular characterization and expression analysis of nuclear oligomerization domain proteins NOD1 and NOD2 in grass carp Ctenopharyngodon idella. Fish Shellfish Immunol. 2010 Jan; 28(1):18-29. Chen WQ（陈文钦）, Xu QQ, Chang MX, Zou J, Se