AAVC-1诱导A549细胞凋亡的线粒体机制研究.pdfVIP

皖南医学院学报(JofWannanMedicalCollege)2017：36(1 · 5 · · 基础医学 · 文章编号：1002-0217(2017)01—0005—04 AAVC．1诱导A549细胞凋亡的线粒体机制研究 徐 成 ，张根葆 ，周淑艳 ，桑金凤 (皖南医学院 1．临床医学院；2．病理生理学教研室；3．蛇毒研究所，安徽 芜湖 241002) 【摘 要】目的：探讨皖南五步蛇蛇毒抑瘤组分I(AAVC．1)诱导人非小细胞型肺癌A549细胞凋亡的作用，并分析其可能的线 粒体机制。方法：以不同作用浓度的AAVC．1处理A549细胞，采用AnnexinV／PI双染流式细胞仪分析法检测A549细胞凋亡 百分率；JC一1检测细胞线粒体的膜电位变化，免疫组化检测细胞色素C在线粒体内的分布。结果：不同浓度梯度 AAVC．11．0、 3．0、9．0、20．0 g／mL处理24h后 ，与对照组相比，A549细胞早期凋亡率明显增加 (P0．05)；线粒体膜电位绿色荧光百分比由 (23．01~6．07)％上升至 (87．26+9．54)％(P0．O1)，荧光显微镜观察到绿色荧光增强 ；免疫组化显示，随着 AAVC一1浓度增加，胞 质内细胞色素C平均光密度值明显增加(P0．05)。结论：AAVC一1可以通过降低线粒体膜电位和促进细胞色素 C的释放，激 活线粒体通路诱导人非小细胞型肺癌A549的凋亡。 【关键词】五步蛇毒抑瘤组分 I；非小细胞型肺癌；线粒体；细胞凋亡 【中图号】R734．2 【文献标志码】A D【OI】10．3969／j．issn．1002．0217．2017．O1．002 M itochondrialmechanism ofAAVC-1inducedapoptosisinA549cells XUCheng，ZHANGGenbao，ZHOUShuyan，SANGJinfeng SchoolofClinicalMedicine，WananMedicalCollege，Wuhu241002，China 【Abstract】Objective：Toinvestigatetheapoptosispathwayandmeeharlismsofhumannon-smallcelllungcancerA549cellsinducedbyanticoagulantfrac— tionfromAgk~trodonacutusvenom(AAVC一1)．Methods：DifferentdoseofAAVC·1wasusedtotreatA549cells，andtheapoptosispercentageofA549 cellswasassessedbyflowcytometrywithannexinV／PIdoublestaining．Mitochondrialtrans—membranepotential(△ m)ofA549cellswasmeasuredby JC一1fluorescenceprobeandmicroscopy．anddistributionofcytochromeCinthemitochondriawasdetectedbyimmunohistochemistryafterAAVC-1treat- ment．Results：TheearlyapoptosisrateofA549cellswassignificantlyincreasedaftertreatmentwithdifferentdoseofAAVC-1for24hascompraedwiththe controlgroup(P0．05)．Thefluorescencegreenintensitywasincreasedfrom(20．13+1．6)％to(89．12+1．2)％(P0．01)，andfluorescencespectroscopy indicatedintensifiedintracellularrgeenfluorescence．ImmunohistochemicaltestrevealedmrakedlyincreasedaveragelightdensityofcytochromeCwithadd— eddoseofAAVC一1treatment(P0．05)．Conclusion：AAVC1caninducetheapoptosis