质粒DNA的提取与检仓锈.pptVIP

质粒DNA的提取及检测;　　　质　粒（plasmid）;常用的质粒载体;　　　　Ampr抗性基因;质粒提取的思路;　　　　凝胶电泳;第一部分　质粒DNA的提取;目 录 返回标题 ;一．目的;二．原理;☆原理示意图 返回目录 返回原理;三、实验仪器、材料与试剂 ;器材;试剂; LB培养基 back ;溶液 I back;溶液 II back;溶液 III back;0.5 mol/L EDTA (pH8.0);TE(pH8.0) back;　　　　四、实验步骤;? 加入150uL溶液III（轻轻混匀），冰上静置15min质粒DNA复性 ? 12000rpm，离心15min，取上清记录体积到一新管 ? 上清加等体积的酚：氯仿：异戊醇（振荡混匀） ? 12000rpm，离心15min，取上清记录体积到一新管 ? （可省略）上清加等体积的氯仿：异戊醇（振荡混匀） ? 12000rpm，离心15min，取上清记录体积到一新管 ? 上清加2倍体积的无水乙醇（充分混匀），冰浴 30min ?;12000rpm，离心15min ? 沉淀用75%乙醇1mL洗涤两次（???弹混匀、离心） ? 12000rpm，离心10min ? 晾干沉淀 ? 沉淀用20ul TE溶解，-200C保存;四．操作步骤;四．操作步骤;分次收集4ml菌液离心，留沉淀;第二部分　琼脂糖凝胶电泳;　相关知识;