毕赤酵母甲酸脱氢酶在大肠杆菌中的融合表达及其-氨基酸和生物资源.pdfVIP

氨基酸和生物资源 ， （）： ２０１５３７１ ３０ ３４ 　 ～ 犃犿犻狀狅犃犮犻犱狊牔犅犻狅狋犻犮犚犲狊狅狌狉犮犲狊 ： ／ 犇犗犐１０．１４１８８ ．ａｓｈ．２０１５．０１．００７ ｊｊ 毕赤酵母甲酸脱氢酶在大肠杆菌中的融合表达及其酶学性质 蔡礼年，黄春辉，林陈水 （浙江工业大学 药学院，浙江 杭州 ３１００１４） 摘要：为了获得高效融合表达的甲酸脱氢酶（ ）工程菌，用 方法从毕赤酵母 （ ）基因 ＦＤＨ ＰＣＲ ＧＳ１１５犘犻犮犺犻犪 犪狊狋狅狉犻狊ＧＳ１１５ 狆 组 中克隆 基因，测序发现第 位多出一个脱氧腺嘌呤核苷酸，基因定点突变后重组至胞内融合表达型 载体 ＤＮＡ ＦＤＨ １０６ Ｔ ，得到重组质粒 ，转化 （ ），获得胞内融合表达型 工程菌。 分析 ｐＥＴＤｓｂＡＴ ｐＥＴＤｓｂＡＦＤＨ 犈．犮狅犾犻ＢＬ２１ＤＥ３ ＦＤＨ ＳＤＳＰＡＧＥ 表明，融合蛋白表观分子量约为 ３，主要以可溶形式存在于胞内。进一步研究得知，酶的最适温度为 ，最适 为 ６５×１０ ５４℃ ｐＨ ；金属离子对酶活有较强的抑制作用， 能增强酶活性。 ８．５ ＥＤＴＡ 关键词：甲酸脱氢酶；克隆；定点突变；融合表达 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｑ７８４ Ａ １００６８３７６２０１５０１００３００５ 犉狌狊犻狅狀犈狓狉犲狊狊犻狅狀狅犳犉狅狉犿犪狋犲犇犲犺犱狉狅犲狀犪狊犲犳狉狅犿犘犻犮犺犻犪 犪狊狋狅狉犻狊 狆 狔 犵 狆 犻狀犈．犮狅犾犻犪狀犱犐狋狊犈狀狕犿犪狋犻犮犘狉狅犲狉狋 狔 狆 狔  ， ， 犆犃犐犔犻狀犻犪狀 犎犝犃犖犌犆犺狌狀犺狌犻犔犐犖犆犺犲狀狊犺狌犻 （ ， ， ， ， ） ＣｏｌｌｅｅｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ Ｚｈｅｉａｎ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏ Ｈａｎｚｈｏｕ３１００１４ Ｚｈｅｉａｎ Ｃｈｉｎａ ｇ ｊ ｇ ｙ ｇｙ ｇ ｊ ｇ ： （ ）， 犃犫狊狋狉犪犮狋Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｏｂｔａｉｎｅｆｆｉｃｉｅｎｔｆｕｓｉｏｎｅｘｒｅｓｓｉｏｎａｌｆｏｒｍａｔｅｄｅｈｄｒｏｅｎａｓｅ ＦＤＨ ＦＤＨｃｏｄｉｎ ｅｎｅｗａｓ