沙门菌鞭毛蛋白增强禽流感灭活疫苗的免疫效力研究.pdfVIP

动物医学进展 。2014，35(9)：6—10 ProgressinVeterinaryMedicine 沙门菌鞭毛蛋 白增强禽流感灭活疫苗的免疫效力研究 黄秀芬 。，章振华 ，王天坤。，孙惠玲 ，陈小玲 。，李永清 (1．畜禽疫病防控技术北京市重点实验室，北京 100097；2．北京市农林科学院畜牧兽医研究所，北京 100097； 3．昌平 区动物预防疫病控制 中心，北京 102200) 摘 要 ：为研制沙门茵鞭毛蛋 白佐剂禽流感疫苗 ，以盐酸裂解法制备和纯化鸡肠炎沙门茵鞭毛蛋 白，将 其作为佐剂，包裹灭活的禽流感病毒 (H9N2亚型)，制备禽流感灭活疫苗并进行动物试验。结果表 明，该疫 苗分别经滴鼻和肌肉注射接种后 ，虽然没有 明显提高免疫鸡的血凝抑制 (HI)抗体水平，但显著提高 了血清 中和呼吸道黏膜分泌液中抗禽流感病毒特异性 IgA水平；攻毒试验结果表明，经滴鼻接种后，单独使用灭活 的AIV没有产生免疫保护作用(O／15)，而鞭毛蛋白佐剂灭活苗免疫组保护率达 53．3 (8／15)；经肌 肉注射 接种后 ，单独免疫灭活的AIV组的保护率为3O (3／10)，而鞭毛蛋 白佐剂灭活苗免疫组保护率达 6O (6／ 10)。表明沙门茵鞭毛蛋 白能够有效促进禽流感灭活疫苗的免疫保护效果。 关键词 ：沙门菌鞭毛 ；禽流感；免疫佐荆；保护效力 中图分类号 ：$852．65 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2014)09—0006～05 禽流感是危害家禽、水禽及飞鸟甚至人类健康 1 材料与方法 的重要传染病。目前 ，为了防控该病 ，人们普遍使用 1．1 材料 疫苗对受威胁 的家禽进行免疫预防口]。然而 ，由于 1．1．1 沙 门菌株 鸡肠炎沙 门菌种 CVCC33—1、 引起该病 的病毒抗原(主要是血凝素和神经氨酸酶) CVCC33—2购 自中国兽药监察所 ，鼠肠炎沙 门菌种 极易变异，致使于人们无法用弱毒疫苗对家禽进行 S1420、18、125109由北京格德海生物技术有 限公司 免疫接种，更没有可以用于野禽或候鸟免疫的口鼻 赠送 ，上述菌株先划线于普通 LB培养基上培养，然 灭活疫苗L2]。此外 ，目前常规制备灭活疫苗的各种 后分别挑取每个菌株单菌落于 5g／L的半 固体培养 佐剂成分对食品安全的威胁越来越成为人们关注的 基上鉴定运动力 ，连续传 5代～6代后选取运动力 热点[3]，因此 ，寻找到一种安全、有效且副作用小的 最好 的细菌落进行扩大培养。 疫苗新佐剂成为研制禽流感疫苗的重要课题。 1．1．2 禽流感病毒 以北京市农林科学院畜牧兽 沙门菌鞭毛是沙 门菌菌体上的保守蛋 白，具有 医研究所用于制备疫苗 的H9N2亚型禽流感病毒 独特结构和功能，很强 的抗原性 (H 抗原)_l4]。研究 (A／chicken／Hebei／2000)种毒接种 于 10 日龄 的 发现，该鞭毛蛋白是通过吸附宿主的黏膜组织 ，再 由 SPF鸡胚绒毛尿囊腔 ，37℃培养 96h后收集尿囊 抗原递呈 细胞 (APC)表面分 子 Toll样 受体一5 液 ，滤过浓缩后作为后续试验制苗用病毒 ，病毒血凝 (TLR5)识别，从而活化 TLR5树 突样细胞 (TLR5一 价为 1：2 。 DCs)、中性粒细胞及上皮细胞 ，再刺激机体产生促 1．2 方法 炎因子，天然免疫应答和获得性免疫应答之间起桥 1．2．1 沙门茵鞭毛蛋 白的制备及质量控制 根据 梁作用 ，引起 Th2型细胞免疫及产生 IgA 的黏膜免 IbrahimGF等的方法_6]，将半固体筛选的运动力最 疫_l5]。因此，以沙 门菌鞭毛为佐剂的禽流感疫苗，有 强的单相沙 门菌接种于 1OmLLB培养基 ，置 37℃、 可能诱导更持久、高效的免疫保护作用 。本研究采 200r／min摇床培养 17h，