激光捕获显微切割技术纯化的人支气管上皮癌变各阶段组织的定量.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2013, 40(6): 538~547 激光捕获显微切割技术纯化的人支气管上皮癌变 各阶段组织的定量蛋白质组学研究* 1) 3) 2) 2) 1) 2)** 1)** 谷清 程爱兰 易 红 李茂玉 李国庆 李建玲 廖 力 1) 2) ( 华大学护理学院，衡阳421001 ； 中 大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室，长沙4 10008 ； 3) 华大学医学院病理教研室，衡阳42100 1) 摘要 为分析支气管上皮癌变进程中的差异表达蛋白质，筛选肺鳞癌早期诊断标志物，以人支气管上皮癌变各阶段组织为研 究对象，先采用激光捕获显微切割技术(LCM) 纯化人正常支气管上皮组织、鳞状化生、不典型增生、原位癌、 润性肺鳞癌 组织，再用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ) 技术结合二维液相色谱串联质谱(2D LC-MS/MS)鉴定支气管上皮癌变进程中 各阶段的差异表达蛋白质 结果共鉴定了 1 036 个蛋白质，筛选出102 个与人支气管上皮癌变相关的差异蛋白质，在这些差 异蛋白质中，有的在支气管上皮癌变过程中进行性上调，有的在支气管上皮癌变过程中进行性下调，有的呈阶段特异性改 变 功能分析表明，这些差异蛋白质涉及代谢、细胞凋亡、增殖、分化、信号传导、转录、翻译、细胞黏附、免疫反应与发 育等 Western blotting 及免疫组织化学技术验证了其中2 个差异蛋白(S100A9 和CKB) 的表达，证实了定量蛋白质组学结果 的可靠性 研究结果提示：这些差异表达蛋白质与支气管上皮癌变相关，并可成为肺鳞癌的早期诊断标志物，进一步研究差 异蛋白质的生物学功能，将有助于阐明支气管上皮的癌变机制，从而为肺鳞癌的早期诊断与发病机制研究提供新思路 关键词 人支气管上皮癌变，肺鳞癌，生物标志物，激光捕获显微切割技术，同位素标记相对和绝对定量 学科分类号 R310.99，R57 DOI: 10.3724/SP.J.1206.20 12.00474 肺癌是常见的恶性肿瘤之一，根据世界卫生组 球 学家为之努力的事情 虽然Sekido，Tseng， 织统计，肺癌的发病率和死亡率均居全球恶性肿瘤 Bai 等从基因水平和转录水平己对肺鳞癌进行了许 的首位 在我国，肺癌是发病率最高的恶性肿瘤之 多成功的研究，但其癌变机制仍不清楚，目前也缺 一，且其发病率和死亡率逐年上升 肺鳞癌作为肺 乏有效的用于早期诊断肺鳞癌的分子标志物[1-3] 癌最主要的组织学类型，它起源于支气管上皮且其 蛋白质是生命活动的执行者，在肺鳞癌癌变过 发生发展是一个多因素、多基因参与、多阶段的复 程中，不论是环境因素还是遗传因素最终都是通过 杂病变过程 在致癌因素作用下，支气管上皮细胞 基因及其相应的蛋白质来发挥作用 肺鳞癌在其不 的癌变过程一般要经过基底细胞增生、鳞状化生， 同的发展阶段，即使在没有任何症状的早期，在蛋 进而进展为不典型增生、原位癌，再发展为浸润 白质水平己经发生了变化，而这些在早期发生变化 癌 然而，其发病机制迄今尚不明确，且肺鳞癌起 病隐匿，早期一般没有明显症状，70%的肺鳞癌临 * 国家自然 学基金81072198)和湖 省自然 学基金 床发现时已是晚期，失去了临床早期治疗的宝贵机 (12JJ6080)资助项目. 会，5 年生存率仅为8.9%～15%，而 期肺鳞癌术 ** 通讯联系人. 后5 年生存率高达80% 因此，阐明肺鳞癌的发 李建玲. Tel: 0731 Fax: 0731 E-mail:j ianlingli@ 病机制与