灰毡毛忍冬抑制表皮生长因子受体激酶活性及活性部位uplcqtof.pdfVIP

学 报 ５２６ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１３，４４（６）：５２６－５３０ 灰毡毛忍冬抑制表皮生长因子受体激酶活性及活性部位 ＵＰＬＣＱＴＯＦ／ＭＳ分析 １ ２ １ １ 任伟光 ，林森森 ，李文涛 ，黄林芳 １ ２ （中国医学科学院药用植物研究所，北京 １００１９３；中国药科大学新药筛选中心，南京２１０００９） 摘　要　应用高通量药物筛选技术，筛选发现具有表皮生长因子受体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥＧＦＲ）激酶抑制活 性的中药提取物，同时采用超高效液相色谱与串联四极杆飞行时间质谱仪联用技术（ＵＰＬＣＱＴＯＦ／ＭＳ）对其活性部位进行分 析和鉴别。灰毡毛忍冬药材经石油醚渗滤、乙醇提取、乙酸乙酯萃取和水煎煮后，得到４个相应的提取部位。采用均相时间分 辨荧光（ＨＴＲＦ）法检测抑制ＥＧＦＲ激酶活性，于波长为６２０和６６５ｎｍ处测定荧光信号的变化及信号值，计算提取物对ＥＧＦＲ 激酶的抑制率。采用ＡｃｑｕｉｔｙＵＰＬＣＢＥＨＣ 色谱柱，以０１％甲酸水溶液（Ａ）乙腈（Ｂ）为流动相梯度洗脱，２１０～４００ｎｍ扫描， １８ 使用ＥＳＩ离子源，在正离子模式下采集数据。结果显示，灰毡毛忍冬的乙酸乙酯部位显示较强的ＥＧＦＲ激酶抑制活性，ＩＣ ５０ 为２０２７ ｇ／ｍＬ。ＱＴＯＦ／ＭＳ测定的一级、二级质谱信息及结合文献鉴定灰毡毛忍冬乙酸乙酯提取物中１１个化合物，其中 μ ７个分别是：咖啡酸（ｃａｆｆｅｉｃａｃｉｄ），七叶内酯（ｅｓｃｕｌｅｔｉｎ），槲皮素（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ），３，５二咖啡酰奎尼酸（３，５Ｏｄｉｃａｆｆｅｏｙｌｑｕｉｎｉｃ ａｃｉｄ），扁柏黄酮（ｈｉｎｏｋｉｆｌａｖｏｎｅ），绿原酸（ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃａｃｉｄ），谷甾醇（ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌ）。３，５二咖啡酰奎尼酸、咖啡酸、扁柏黄酮 β β 为灰毡毛忍冬的主要成分，灰毡毛忍冬中含有的酚酸类和黄酮类化合物可能是抑制ＥＧＦＲ激酶活性的主要成分。 关键词　ＥＧＦＲ激酶抑制剂；高通量筛选；灰毡毛忍冬；提取物；有效成分；ＵＰＬＣＱＴＯＦ／ＭＳ 中图分类号　Ｒ９１７　　文献标志码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１３）０６－０５２６－０５ ｄｏｉ：１０．１１６６５／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－５０４８ ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｏｆｔｈｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｐａｒｔｏｆａｎｔｉＥＧＦＲｏｆＬｏｎｉｃｅｒａ ｍａｃｒａｎｔｈｏｉｄｅｓＨａｎｄ．ＭａｚｚｂｙＵＰＬＣＱＴＯＦＭＳ １ ２ １ １ ＲＥＮＷｅｉｇｕａｎｇ牞ＬＩＮＳｅｎｓｅｎ牞ＬＩＷｅｎｔａｏ牞ＨＵＡＮＧＬｉｎｆａｎｇ １ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｅｄｉｃｉｎａｌＰｌａｎｔＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ牞ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ＆ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｏｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ牞Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１９３牷 ２ＮｅｗＤｒｕｇＳｃｒｅｅｎｉｎｇＣｅｎｔｅｒ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｈｉｇｈｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔｄｒｕｇｓｃｒｅｅｎｉｎｇ牞ｓｃｒｅｅｎｉｎｇａｎｔｉｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ牗ＥＧ ＦＲ牘ａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅｈｅｒｂｅｘｔｒａｃｔｓ牞ａｎｄｔｈｅｃｏ