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药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 17, 52 (5): 821 83 1 ·821 ·
行菜 C4H 基因克隆与表达分析
1, 2 1, 2 1 1, 2 1, 2*
乐 , 马利刚 , 杨泽岸 , 冯卫生 , 郑晓珂
(1. 河南中医药大学药学院, 河南 郑州 450046; 2. 呼吸疾病诊疗与新 研发河南省协同创新中心, 河南 郑州 450046)
摘要: 以独行菜 (Lep idium apetalum) 为材料, 通过分析独行菜转录组数据, 设计特异性引物, 克隆了独行
菜肉桂酸-4-羟化酶 (cinnamate-4-hydroxylase, C4H) 基因的 cDNA 序列, 命名为 LaC4H, GenBank 登录号为
KX064050, 并进行生物信息学分析, 原核表达、纯化, 组织特异性分析和诱导表达分析。结果表明: LaC4H 基
因开放阅读框 (ORF) 长 1 518 bp, 编码505 个 基酸, 其蛋白质分子质量为57.73 kD 。② 生物信息学分析显示
LaC4H 蛋白包含细胞色素P450 的保守基序和 5 个特征性底物结合位点, 是细胞色素P450 超家族成员, 系统进
化分析显示 LaC4H 蛋白与拟南芥等十字花科植物 C4H 蛋白同源性较高。③ 通过构建原核表达载体
pET-32a-LaC4H 在大肠杆菌 BL21 (DE3) 菌株中成功表达 LaC4H 重组蛋白, 利用 Ni2+亲和色谱得到了纯化的
LaC4H 重组蛋白。④ 荧光定量PCR 结果表明LaC4H 基因在茎中表达量最高, 叶和花中次之, 根中表达量最低。
经茉莉酸甲酯 (methyl jas monate, MeJA) 诱导后, 叶中LaC4H 表达量明显上升, 诱导后48 h 达到最高值, 叶中
La C4H 的表达量与黄酮含量之间呈正相关。这为进一步研究La C4H 基因在独行菜黄酮类化合物生物合成途径中
的功能奠定基础。
关键词: 独行菜; 肉桂酸-4-羟化酶; 基因克隆; 生物信息学分析; 表达分析
中图分类号: R93 1 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 17) 05-0821-11
Cloning and expression analysis of C4H gene from Lepidium ape talum
1, 2 1, 2 1 1, 2 1, 2*
ZHAO Le , MA Li-gang , YANG Ze-an , FENG Wei-sheng , ZHENG Xiao-ke
(1. School of Pharmacy, Henan University of Tradit
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