靶向人类心脏发育候选基因hole的sirna真核-中国动脉硬化杂志.pdfVIP

CN43鄄1262/ R摇 中国动脉硬化杂志2012年第20卷第5期 397 [文章编号]摇 1007鄄3949(2012)20鄄05鄄0397鄄05 ·实验研究 · 靶向人类心脏发育候选基因hole的siRNA真核表达 载体的构建和鉴定 1,2 3 2 2 2 周军媚 ,姚 峰 ,谢华平 ,叶湘漓 ,王跃群 (南华大学1.药学与生命科学学院,3.实验动物学部,湖南省衡阳市421001; 2.湖南师范大学生命科学学院,湖南省长沙市410006) [关键词]摇 心脏发育;摇 hole;摇 pSUPER;摇 siRNA;摇 H9c2 细胞 [摘摇 要]摇 目的摇 利用siRNA表达载体构建靶向人类心脏发育候选基因hole 的pSUPER RNAi载体系(pSUPER鄄 hole)及筛选稳定产毒的细胞克隆。 方法摇 化学合成一对编码短发夹RNA 序列的、靶向人类心脏发育候选基因 hole 的寡核苷酸链60 个碱基,退火,克隆到经Bgl域、Xho 玉双酶切的pSUPER 质粒上,构建重组RNAi质粒(pSU鄄 PER鄄hole)。 通过双酶切鉴定及测序分析验证构建效果。 将正确构建的质粒转染大鼠心肌细胞H9c2,经过puro抗 生素的筛选,建立稳定产生逆转录病毒的细胞模型,采用RT鄄PCR检测其抑制效果。 结果摇 pSUPER鄄hole载体经双 酶切鉴定及测序分析,结果表明60 个碱基成功插入到预计位点,并且序列完全一致。 重组载体转染包装细胞,筛 选的细胞克隆均可表达绿色荧光蛋白,表明包装成功。 RT鄄PCR检测表明pSUPER鄄hole 能成功抑制hole基因的表 达。 结论摇 靶向人类心脏发育候选基因hole 的siRNA真核表达载体构建成功。 [中图分类号]摇 Q34 [文献标识码]摇 A Construction and Identification of Eukaryotic siRNA Expression Vector Targeting Human Heart Developmental Candidate Genehole Gene 1,2 3 2 2 2 ZHOUJun鄄Mei ,YAO Feng ,XIE Hua鄄Ping ,YE Xiang鄄Li ,and WANGYue鄄Qun (1.College of Pharmacy andLife Science,3.Department of LaboratoryAnimal Science,University of South China,Hengy鄄 ang,Hunan421001,China;2.College of Life Sciences,HunanNormal University,Changsha,Hunan410006,China) [KEY WORDS]摇 Heart Development;摇 hole;摇 pSUPER;摇 siRNA;摇 H9c2 [ABSTRACT]摇 摇 Aim摇 To construct a pSUPER RNAi system that targets human heart developmental candidate gene hole and a stable virus鄄producing cell line.摇 摇 Methods摇 A pair of 60nt oligonucleotides coding for short hairpin RNA and targ